珍貴細胞被細菌污染了怎么辦？

　　培養的珍貴細胞如果出現支原體的污染，細胞要保種，不舍得丟掉，我們知道可采用Minerva公司的Mynox或Mynox Gold祛除支原體（具體詳請點(diǎn)擊文章《細胞狀態(tài)不好，你排除過(guò)支原體嗎？》），如果出現細菌污染，我們應該怎么辦呢？

　　對于細胞系，這的確是一個(gè)難題。小威根據北京市耳鼻咽喉科研究所在一篇文章中發(fā)表的幾種解決方法，總結如下，可供感興趣的人員參考。

　　*種方法: 抗生素除菌法

　　在該文中，當一種人喉癌細胞系被懷疑有細菌污染時(shí)，研究人員將培養上清液離心，將沉淀物行常規血瓊脂培養，培養5-7d后開(kāi)始出現灰白色細小菌落，經(jīng)全自動(dòng)細菌鑒定儀生化鑒定條檢測為嗜麥芽寡養食單胞菌，又進(jìn)行了15種抗生素的藥敏實(shí)驗，發(fā)現該菌對其中3種抗生素敏感，其余均耐藥，包括對青鏈霉素耐藥。

　　圖 對多種抗生素耐藥的嗜麥芽寡養食單胞菌

　　接下來(lái)，研究人員進(jìn)行了抗生素*抑菌濃度的篩選。每種抗生素配了6個(gè)濃度梯度。將受污染的細胞接種到96孔板，加入含敏感抗生素的*培養液，24 h后換無(wú)抗生素培養液培養1d。如此重復3次，連續7d。找出*抑菌濃度后，研究人員讓細胞分別在抗生素*抑菌濃度中傳代1代至3代，發(fā)現細胞生長(cháng)良好，但撤離抗生素后，重又出現細菌污染。

   作者認為：抗生物主要是抑制細菌生長(cháng)，而不能*殺死細菌。因此，有針對性地使用抗生素或許可以短期控制住細胞中污染細菌的生長(cháng)，但不能*細菌。

　　第二種方法: 抗生素聯(lián)合巨噬細胞吞噬法

　　即抗生素處理過(guò)的細胞再與小鼠的巨噬細胞共培養3d。3d后換液，棄去巨噬細胞。間隔一周后再用巨噬細胞共培養一次。結果顯示，此方法效果不佳。

　　第三種方法: 裸鼠體內接種法

　　研究人員將受污染的喉癌細胞系細胞按1×106個(gè)/ml接種裸鼠腋下皮下，連續觀(guān)察，當腫物長(cháng)至約1cm3后，脫頸處死動(dòng)物，無(wú)菌操作取出腫物，做組織細胞培養。

   結果顯示，腫瘤細胞接種裸鼠體內40 d后開(kāi)始出現腫塊，60d長(cháng)至1cm3左右。之后將組織塊培養于含上述篩選過(guò)的三種抗生素的*培養基，14d后改用無(wú)抗生素培養，持續培養3周。結果細胞生長(cháng)良好。之后自然傳代8次，凍存1個(gè)月后復蘇，細胞仍能貼壁生長(cháng)。取上清液做細菌培養，結果為無(wú)菌生長(cháng)。

　　作者認為，細菌在裸鼠體內可被巨噬細胞和中性粒細胞吞噬、NK細胞殺滅，以及被結合抗體的補體殺死。裸鼠體內接種法能*殺滅細菌，細胞上清的細菌培養為陰性。細胞生物學(xué)特性也保持良好。

　　因此，敏感抗生素的篩選和使用可以短期清除污染菌，而動(dòng)物體內接種才是zui有效和*的除菌方法。雖然上述受污染的細胞屬于腫瘤細胞系，但對其他受污染的細胞，也會(huì )帶來(lái)一定的啟示。

　　參考文獻

　　王鴻，張偉，孟娜。 細胞培養中珍貴貼壁細胞污染挽救方法的評價(jià)。 首都醫科大學(xué)學(xué)報。2011,32（1）：129-134

　　Minerva Biolabs GmbH公司簡(jiǎn)介

　　德國Minerva Biolabs GmbH 公司是世界上的微生物污染控制公司。其zui引以為豪的研發(fā)核心，體現在細胞培養和生物制藥領(lǐng)域的支原體、細菌和病毒污染控制，其產(chǎn)品和技術(shù)在世界上遙遙。　公司總部設立于德國柏林，專(zhuān)注微生物污染檢測與清除產(chǎn)品的研發(fā)和銷(xiāo)售。 公司創(chuàng )始人來(lái)自于聞名的羅伯特·科赫微生物研究所。Minerva公司zui引以為豪的研發(fā)核心，體現在細胞培養和生物制藥領(lǐng)域的支原體、細菌和病毒污染控制。

　　此外，Minerva研發(fā)的用于『PCR診斷法的專(zhuān)業(yè)工具和試劑』，不僅可以檢測飲料中的微生物污染，還可以用于檢測未申報的肉類(lèi)制品以及清真、素食產(chǎn)品的質(zhì)量控制。再加上『驗證PCR儀合格性的試劑』以及『清除PCR實(shí)驗室DNA污染的試劑』，多種產(chǎn)品完整了Minerva的產(chǎn)品線(xiàn)，能夠滿(mǎn)足客戶(hù)全方面的需求。在污染控制，臨床診斷和水質(zhì)的檢測領(lǐng)域，Minerva不遺余力地開(kāi)拓進(jìn)取，是實(shí)驗人員和生產(chǎn)企業(yè)值得信賴(lài)的合作伙伴。Minerva公司作為合作制造商，還從事分子生物學(xué)試劑、PCR分析和樣品制備試劑的設計與生產(chǎn)。

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