活性因子的生物測定法——締一生物|締一生物

在分析化學(xué)中，常常采用色譜、質(zhì)譜、磁共振和一般生化以及免疫學(xué)方法對樣本成分進(jìn)行測定。但還存在一類(lèi)特殊的測定方法，即生物測定法。生物測定法的產(chǎn)生由來(lái)已久，常常用于有生物活性和生理功能的因子的測定。它常常采用一種哺乳動(dòng)物細胞或者一種細菌，作為可用于觀(guān)察或測量的響應器或效應器(effector)，來(lái)對活性因子進(jìn)行檢測，這也有些近似藥效學(xué)實(shí)驗。例如白細胞介素2，它是一種T細胞生長(cháng)因子，它是用小鼠的T淋巴細胞系CTLL-2細胞的增殖來(lái)檢測，ED50等于0.1ng/ml，可見(jiàn)該法的靈敏度相當高。

因此，生物測定在方法學(xué)上是一種很有特點(diǎn)、很有用的方法。它也不限于測定某個(gè)因子，而也可以測定生物制品，如用二倍體細胞的促生長(cháng)狀況來(lái)質(zhì)控胎牛血清。在食品領(lǐng)域中，也有生物測定法，只不過(guò)是其中的一個(gè)分支，是微生物培養法，或微生物法，來(lái)檢測維生素，如微生物B12、葉酸、泛酸、煙酸、生物素等。

維生素也是一類(lèi)活性因子，具有重要的生理作用。例如，缺少葉酸會(huì )導致胎兒神經(jīng)管發(fā)育障礙。而我國的嬰幼兒配方乳品中，存在有的品牌葉酸等維生素不足的情況，因而達不到補充營(yíng)養的效果。因此，測定食品中的維生素含量十分重要，尤其是奶制品。

微生物法測定維生素，原理和上面所說(shuō)差不多。通過(guò)添加維生素標準品或樣品中的維生素，使原先不含有這種維生素的培養基具有了這種營(yíng)養，從而使鼠李糖乳桿菌、萊士曼乳桿菌、植物乳桿菌等測定菌能夠不斷增殖，直到這種維生素營(yíng)養耗盡。而檢測OD值可以確定試管中的菌量。需要注意的是，為了保證線(xiàn)性增長(cháng)，需要在適當的范圍內進(jìn)行標曲和測定，必要的話(huà)對樣本進(jìn)行稀釋。又葉酸測定菌鼠李糖乳桿菌據報道，在增殖過(guò)程中容易產(chǎn)生大量絮狀沉淀，尤其在高濃度標準管中更為明顯。因此建議將絮狀物質(zhì)進(jìn)行充分震蕩，并快速進(jìn)行光密度的測定。同時(shí)注意所用初始培養基應盡量不含痕量待測的維生素，否則會(huì )造成標曲偏移和本底過(guò)高。目前該產(chǎn)品只有進(jìn)口的質(zhì)量較為可靠，如微生物培養基生產(chǎn)商HiMedia公司生產(chǎn)的葉酸干酪培養基和維生素B12測定用培養基。

總之，微生物法在生物測定法中靈敏度*，而且操作步驟簡(jiǎn)單，不需要特別的技巧和設備，也不需要一系列的提純步驟。即使有些類(lèi)別樣品需要提取，但步驟仍然簡(jiǎn)單，因此微生物法在生物測定法中仍然占有重要的一席之地。