快速分離水中腸球菌的方法

腸球菌屬（Enterococcus），為革蘭陽(yáng)性，成雙或短鏈狀排列的卵圓形球菌，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，部分腸球菌有稀疏鞭毛。腸球菌初列為D群鏈球菌，1984年，腸球菌被重新分類(lèi)為腸球菌屬，在經(jīng)過(guò)DNA-DNA和DNA-RNA雜交的研究后證明它與鏈球菌屬有較遠的關(guān)系。

腸球菌是人類(lèi)和動(dòng)物腸道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現，既往認為腸球菌是對人類(lèi)無(wú)害的共棲菌，但近年研究已證實(shí)了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽(yáng)性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的重要院內感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內膜炎和腦膜炎等。

腸球菌通常從食品、植物、水和土壤中分離，可能由于它的來(lái)源是糞便使得他們的天性在惡劣環(huán)境中比較耐受。在牛奶和奶酪制品中通常會(huì )找到糞腸球菌、屎腸球菌和少量的堅忍腸球菌，偶然也會(huì )發(fā)現小腸腸球菌和鉛黃腸球菌。不同于其他乳酸菌，腸球菌不能被認為是“一般認為安全”（GRAS），并且它在水中檢測是作為糞便污染物的指標的。一般認為對于腸球菌的安全評價(jià)程序是一個(gè)模棱兩可的狀況。一方面，腸球菌在作為奶酪技術(shù)中作為發(fā)酵培養物被認為是由積極作用的；另一方面，它們被認為是新興的人類(lèi)病原體。

由于腸球菌的表型多樣性，這使得腸球菌種的生理測試鑒定一直存在問(wèn)題。此外，物種鑒定的常規實(shí)驗往往需要很長(cháng)的培養時(shí)間。使用16S和23S rDNA基因的基因型鑒定方法更加的準確，但是它們還不能區分所有腸球菌的物種（例如鶉雞腸球菌和鉛黃腸球菌有99.8%的16S rDNA的同源性）。

國標中分離和鑒定腸球菌應用傾注法，根據樣液在選擇性腸球菌瓊脂（36 ℃±2 ℃培養18 h～24 h）或KF瓊脂（36 ℃±2 ℃ 培養24 h～ 48h）上生長(cháng)的典型菌落數，在腸球菌瓊脂平板上形成帶棕色環(huán)的棕黑色菌落；在KF平板上形成暗紅色至粉紅色菌落，邊緣整齊， 用無(wú)菌接種針從每個(gè)腸球菌瓊脂平板或KF平板挑取5個(gè)典型菌落，進(jìn)一步做確證實(shí)驗。

HiMedia公司（微生物培養基生產(chǎn)商）生產(chǎn)的快速腸球菌顯色培養基（貨號：M1414），該培養基中的蛋白胨為菌種提供氮源，添加的氯化鈉使腸球菌的快速生長(cháng)保持滲透平衡，dietanhuana能抑制伴隨的微生物菌落，尤其是革蘭氏陰性菌，存在于腸球菌中的酶β-D-葡糖苷酶裂解顯色底物，使菌落呈藍綠色。HiMedia的快速腸球菌顯色培養基用于快速鑒定和區分水樣中的腸球菌，18-24h后出結果，方便快捷。我國在新修訂的生活飲用水衛生標準GB5749-2006中資料性附件中增加了腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿菌，修訂后限值腸球菌/（CFU/100mL） 和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿/（CFU/100mL）限值均為0，快速腸球菌顯色培養基的研發(fā)，為快速檢測水中腸桿菌起到重要意義。

快速腸球菌顯色培養基（貨號：M1414）在上得到了廣泛的應用，如Chellandi Mohandass等人，在研究喀徹灣沿岸的沿海地區，潮汐周期中水質(zhì)指標的分散性和可收回性文章中就有應用（Chellandi Mohandass, S. Jaya KumarN, Ramaiah.Dispersion and retrievability of water quality indicators during tidal cycles in coastal Salaya, Gulf of Kachchh.Environmental Monitoring and Assessment[J], 2010, 169(10): 639–645）；Krishna M. Raja等人，推定致病性標記香港海鷗形菌的ESBL基因和脂多糖的分子生物學(xué)研究中也有應用（Krishna M. Raja ,Asit Ranjan Ghosh.Molecular Insight of Putative Pathogenicity Markers with ESBL Genes and Lipopolysaccharide in Laribacter hongkongensis.Applied Biochemistry and Biotechnology[J], 2014, 174(5) : 1935–1944.）