單增李斯特菌的檢測方法

傳統檢測方法

食品中單增李斯特菌的傳統檢測方法包括增菌、分離和鑒定 3 個(gè)環(huán)節。目前，分離環(huán)節常會(huì )采用顯色培養基，使其菌落顏色不同于其它干擾菌，實(shí)現快速分離。這里推薦HiMedia公司（微生物培養基生產(chǎn)商）生產(chǎn)的李斯特菌顯色培養基（HiCrome標識，貨號MV1540）。由于單核細胞增生李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌具有相似的生化特性，傳統培養基（PALCAM培養基）不能區分，使用HiMedia李斯特菌顯色培養基（MV1540）可有效區分單增李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌，且它在制備時(shí)用無(wú)瘋牛病風(fēng)險的植物蛋白胨取代了動(dòng)物蛋白胨，安全可靠。

鑒定常采用生化反應和血清學(xué)反應。目前，生化反應的鑒定技術(shù)多采用數值分類(lèi)鑒定和自動(dòng)化檢測技術(shù)。該技術(shù)主要包括：（1）HiMedia公司的HiBio-IDTM李斯特菌生化鑒定卡（貨號：KB012A）或HiBio-IDTM動(dòng)力學(xué)李斯特菌生化鑒定卡（貨號：KBM003A）、API Listeria 生化鑒定試紙條。（2）全自動(dòng)微生物分析系統，HiMedia公司HiBio-IDTMReader全自動(dòng)李斯特菌生化鑒定儀、VITEK 系統、MIDI 系統及 BIOLOG 系統等。

單增李斯特菌的檢測除傳統檢測方法外還有多種快速檢測方法，主要應用于增菌以后，生化鑒定之前，對陰性樣本進(jìn)行快速篩選，以縮小檢測范圍，減少檢測任務(wù)，提高檢測效率及準確率?？焖贆z測方法主要包括免疫學(xué)和分子生物學(xué)檢測兩大類(lèi)。

免疫學(xué)檢測法

該技術(shù)以抗原抗體免疫為基礎，制備特異性克隆抗體檢測細菌。目前國內外李斯特菌快速檢測的此類(lèi)技術(shù)主要包括：酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)、金標免疫層析技術(shù)、流式細胞技術(shù)等。ELFA靈敏度比ELISA高，并省去了ELISA中的顏色反應，縮短反應時(shí)間；但缺點(diǎn)是成本較高，目前主要應用在自動(dòng)酶聯(lián)熒光免疫檢測系統(VIDAS)上。

金標免疫層析技術(shù)是將高度特異性抗單增李斯特菌抗原的抗體束縛在色原載體上，且可與固相支撐基質(zhì)相分離。當檢測樣品中存在李斯特菌時(shí)，測試單元的試劑將會(huì )被展開(kāi)，產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的確定性反應。流式細胞術(shù)是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細胞，并能同時(shí)從一個(gè)細胞中測得多個(gè)參數。

分子生物學(xué)檢測方法

分子生物學(xué)檢測方法主要包括核酸探針雜交技術(shù)、PCR檢測技術(shù)等。DNA探針?lè )ㄊ菍蓷l堿基互補的DNA鏈在適當的條件下雜交，通過(guò)檢測樣品與標記性DNA探針之間形成的雜交分子來(lái)檢測樣品中的單增李斯特菌，測定放射性或熒光強度即可得出樣品中單增李斯特菌的個(gè)數。PCR是近年來(lái)廣泛應用的分子生物學(xué)檢測方法，在單增李斯特菌的檢測中以其遺傳物質(zhì)高度保守的核酸序列（常用的靶序列包括hly、actA、prfA等）設計引物進(jìn)行擴增。

該方法特異性好，但靈敏度低，對樣品進(jìn)行前處理后再進(jìn)行擴增，可以提高檢出率和檢測靈敏度。PCR技術(shù)還可對單增李斯特菌進(jìn)行定量檢測。國內外目前主要應用的PCR技術(shù)包括：實(shí)時(shí)熒光PCR(Real-time PCR)、多重PCR、恒溫擴增、RT-PCR方法、IMS-PCR檢測技術(shù)等。