M199培養基的改良可使疫苗增產(chǎn)

M199是經(jīng)典的細胞培養基，也常作為疫苗生產(chǎn)用的培養液，用于地鼠腎細胞、原代雞胚細胞、Vero細胞的大規模培養。這其中，也添加有新生牛血清，水解乳蛋白等。

近年有文獻報道，改良的M199比經(jīng)典的M199的效果更好1。但具體的改良配方并未透露，只提到調整了氨基酸等營(yíng)養成分的配比。因此，如果在不升高成本的情況下，改用改進(jìn)后的M199培養基，會(huì )帶來(lái)更好的細胞培養效果和經(jīng)濟效益。

在現有培養基中，SFRE199是值得關(guān)注的，它恰好是M199的改良型。它的改進(jìn)方面主要為：1、升高了葡萄糖和8種氨基酸（精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸）的濃度，使其達到促進(jìn)細胞的大活力，而又不產(chǎn)生毒性；2、加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚(yú)精蛋白鋅胰島素。3、降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。4、加入了半乳糖。實(shí)驗發(fā)現，半乳糖可使細胞培養液中的乳酸降低54%3，使pH保持穩定。

SFRE199初是用于原代狒狒腎細胞的培養3，后來(lái)也有用于牛輸卵管峽部上皮細胞和壺腹上皮細胞的培養。其特點(diǎn)是，都只用了SFRE199，而沒(méi)有添加血清，細胞的培養效果仍然理想。值得注意的是，原代細胞較細胞系難培養，因此，SFRE199中升高的氨基酸和葡萄糖濃度，顯然更有利于原代細胞的生長(cháng)。同時(shí)，上述細胞都屬于泌尿生殖系細胞。Vero細胞、地鼠腎細胞與上述細胞的起源相同，可以想見(jiàn)，SFRE199也同樣非常有可能適用于這些疫苗生產(chǎn)細胞的培養。事實(shí)上，國外在1992年時(shí)即有報道3，用SFRE199作為化學(xué)限定培養基的一部分，用于Vero細胞的靜置培養和懸浮培養，只不過(guò)還添加了BSA和血清替代物等，并且發(fā)現，SFRE199培養的效果很好。而在實(shí)際應用中，用SFRE199替代M199，同時(shí)降低牛血清的用量，也是非常有可能的，從而降低生產(chǎn)成本。

在SFRE199對M199的改進(jìn)中，值得注意的是添加了硫酸鋅和胰島素。有研究者發(fā)現，如果在SFRE199中去除這2個(gè)成分，則細胞二倍分裂時(shí)間延長(cháng)，細胞不能很快長(cháng)滿(mǎn)，若含有這2種成分，則該培養基支持生長(cháng)的能力相當于標準對照血清培養基3。

因此，如果疫苗生產(chǎn)企業(yè)目前用的培養液是M199，則推薦更換為SFRE199，因為生產(chǎn)成本沒(méi)有增加，而細胞生長(cháng)和病毒滴度卻可有一個(gè)理想的結果。

參考文獻

1. 陳嘉雯，等. 改良M199培養基在Vero細胞培養中的適用性. 中國生物制品學(xué)雜志. 2014, 27(1): 76-77

2. 吳長(cháng)安. 無(wú)血清化學(xué)限定培養基對原代細胞的培養及其對病毒的敏感性?！秶忉t學(xué).生物制品分冊》. 1981年04期

3. Jack Litwin. The growth of Vero cells in suspension as cell-aggregates in serum-free media. Cytotecnology 10:169-174,1992