ISO關(guān)于沙門(mén)氏菌檢測方法的說(shuō)明

2017年，ISO出臺了一個(gè)沙門(mén)氏菌檢查的標準，即ISO 6579-1-2017 食物鏈的微生物 沙門(mén)氏菌檢測計數和血清分型的水平方法。第1部分是沙門(mén)氏菌屬的檢測。該方法面向的是食品、乳與乳制品、動(dòng)物飼料、動(dòng)物糞便和食品加工處理的環(huán)境樣品。下面將該方法簡(jiǎn)要描述一下：

步：預增菌。

ISO推薦的仍是緩沖蛋白胨水（簡(jiǎn)稱(chēng)BPW）（非選擇性液體培養基）：先將BPW放置室溫。接種后，34-38℃孵育18h。如果是大量樣品（1L以上），則建議先將BPW預熱至34-38℃，再和樣品混合。ISO指出：沙門(mén)氏菌經(jīng)常小量存在，并伴隨有大量的其他腸桿菌科成員。預增菌的目的是用于能檢測到低豐度的沙門(mén)氏菌或受損傷的沙門(mén)氏菌。

第二步：選擇性增菌。

ISO推薦是兩種選擇性增菌培養基，同時(shí)使用。種是含大豆的RVS肉湯或MSRV瓊脂（Rappaport-Vassiliadis瓊脂），41.5℃孵育24h，第二種是MKTTn肉湯，37℃孵育24h。ISO還指出，MSRV瓊脂適合有動(dòng)力的沙門(mén)氏菌，不適合無(wú)動(dòng)力的沙門(mén)氏菌。

第三步：分離。

即接種到推薦的兩種選擇性固體培養基上。種是XLD瓊脂，37℃孵育24h以上。典型菌落為黑色中心，紅色輕微透明光暈。但有個(gè)別例外，即H2S陰性沙門(mén)氏菌變種為粉色菌落，深粉色中心；乳糖發(fā)酵陽(yáng)性的沙門(mén)氏菌為黃色菌落，有或沒(méi)有黑色中心。ISO推薦再選用一個(gè)選擇性培養基進(jìn)行分離。我們推薦HiMedia公司生產(chǎn)的顯色培養基HiCrome 沙門(mén)氏菌HiVeg 瓊脂（貨號MV1296）HiCrome是HiMedia顯色培養基的標識，HiVeg是培養基無(wú)動(dòng)物成分，用植物蛋白胨取代動(dòng)物蛋白胨的標識，這樣培養基無(wú)動(dòng)物源成分帶來(lái)的瘋牛病風(fēng)險。

該顯色培養基建立在Rambach瓊脂基礎上，沙門(mén)氏菌菌落（包括腸炎沙門(mén)菌、鼠傷寒沙門(mén)菌、傷寒沙門(mén)菌）為淡紫色，有光暈，大腸桿菌為藍色菌落，奇異變形桿菌為無(wú)色菌落（見(jiàn)下圖）。該培養基特異性高，接種50-100CFU沙門(mén)氏菌，回收率≥50%。

第四步：驗證。

用生化試驗或血清學(xué)試驗驗證。使用生化鑒定試劑盒（鑒定條）則相當方便，我們推薦HiMedia生產(chǎn)的沙門(mén)氏菌鑒定試劑盒（KB011）。該鑒定條集成了7項生化試驗和5項糖發(fā)酵試驗，可鑒定18種沙門(mén)氏菌，許多是鑒定到種。對于菌株的鑒定，則應進(jìn)行血清學(xué)試驗。

（HiMedia生化鑒定條示意圖）

“ISO 6579-1-2017”和我國《GB 4789.4-2016 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 沙門(mén)氏菌檢驗》相比，在增菌上和分離步驟上，都有一些不同。尤其是分離步驟進(jìn)行了簡(jiǎn)化。因為市面上的沙門(mén)氏菌顯色培養基眾多，ISO只是推薦再選用一個(gè)選擇性培養基進(jìn)行分離，而沒(méi)有明確指出是哪一類(lèi)或是原理是什么。但HiMedia開(kāi)發(fā)的沙門(mén)氏菌顯色培養基顯然是值得注意和推薦的一款，其沙門(mén)氏菌落上帶有紅色光暈，尤其容易辨識。