大腸桿菌O157：H7顯色培養基（CT-SMAC 平板）（國標）

原理　 　 　 　 　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

麥康凱山梨醇瓊脂培養基 是根據Rappaport和Henigh的文獻描述而制備的（1）。培養基中含有山梨醇和BC指示劑，不含乳糖。用于鑒別大腸桿菌O157:H7腸道病原菌。

大多數大腸菌群菌株 會(huì )發(fā)酵山梨醇，產(chǎn)生酸。當pH值低于6.8時(shí)，培養基中的中性紅會(huì )變成粉紅色。同時(shí)普通大腸桿菌具有ß-D葡萄糖醛酸酶，當遇到培養基中BC指示劑時(shí)，會(huì )呈現藍綠色。當兩種顏色疊加時(shí)，普通大腸桿菌在此種培養基中，終會(huì )呈現藍紫色。

大腸桿菌O157:H7不發(fā)酵山梨醇（2），也不具備ß-D葡萄糖醛酸酶活性（3），因而在此種培養基中產(chǎn)生的菌落為無(wú)色。

March和Ratnam報告（2），山梨醇麥康凱瓊脂培養基對大腸桿菌O157:H7的檢測具有100%的敏感性和85%的特異性，該培養基可作為篩選大腸桿菌O157:H7的可靠手段。

此培養基中：碳源、氮源及其它必要的生長(cháng)營(yíng)養素，由酪蛋白酶解產(chǎn)物和?蛋白胨提供；結晶紫和膽鹽會(huì )抑制大多數革蘭氏陽(yáng)性菌生長(cháng)；培養基中的氯化鈉維持滲透壓平衡。

如果需要，此培養基還可添加 碲酸鹽頭孢克肟添加劑（FD147），可使培養基更具有選擇性（4）。亞碲酸鉀可使大腸桿菌O157選擇性生長(cháng)，并抑制嗜水氣單胞菌和普羅維登菌的生長(cháng)；頭孢克肟可抑制變形桿菌。

注：假單胞菌在此培養基中也可產(chǎn)生無(wú)色菌落。若需對可疑菌落辨別，可進(jìn)行氧化酶試驗，在5-10秒內觀(guān)察結果。

應用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

HiCrome™麥康凱山梨醇瓊脂培養基 推薦用于從食物和動(dòng)物飼料中選擇性分離大腸桿菌O157:H7。

培養基成分　　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

成分                                 克/升

酪蛋白酶水解物               17

?蛋白胨                           3

山梨醇                             10

膽鹽混合物                       1.5

氯化鈉                              5

結晶紫                             0.01

中性紅                             0.03

BC指示劑 ,                        01

瓊脂                                13.5

終pH（25℃）              7.1±0.2

配制　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

在495ml蒸餾水中溶解25.06克,加熱至沸騰以*溶解。15磅滅菌（121°C）15分鐘。冷卻到45°C?；靹?，倒入無(wú)菌培養皿。

如果需要添加液態(tài)碲酸鹽頭孢克肟添加劑（FD147），在無(wú)菌培養基冷卻前添加。

質(zhì)量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

● 外觀(guān)——淺黃色至粉紅色，單一自由流動(dòng)粉末

● 成膠性——牢固，可與1.35%瓊脂凝膠相媲美

● 制備好的培養基的顏色和透明度——在培養皿中為紫紅色、澄清并稍不 透明的凝膠形式

● 配比濃度——5.01%w／v(5.01g/100ml水)水溶液在25°C下pH為7.1±0.2

● pH值——6.90-7.30

培養結果　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

5-37°C孵育18-24小時(shí)后觀(guān)察培養特征（如有必要，可延至48小時(shí)）。

參考文獻 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

1.Hansen W. and Yourassawsky E., (1984), J. Clin. Microbiol., 20:1177.

2.Karmali M.A., Petric M., Lim C., et al, (1985), J. Infect. Dis., 151-775.

3.Thompson et al. (1990). J. Clin. Microbiol. 29, 2165-2168.

4.Zadik P.M., Chapman P.A. and Siddons C.A., (1993), J. Med. Microbiol., 39, 155-158.

產(chǎn)品引用文獻

1. Sreepriya Prakasan, Parmanand Prabhakar, Manjusha Lekshmi, Sanath Kumar,Binaya Bhusan Nayak.Isolation of Shiga toxin-producing Escherichia coli harboring variant Shiga toxin genes from seafood.Vet World. 2018 Mar; 11(3): 379–385.

2. SK Manna, C Manna,et al.Serogroup distribution and virulence characteristics of sorbitol-negative Escherichia coli from food and cattle stool.Journal of Applied Microbiology, 2010, 108 (2) :658–665

3. KM Mbae，MK Ndwiga，FG Kiruki.Microbiological Quality of Kachumbari , a Raw Vegetable Salad Popularly Served Alongside Roast Meat in Kenya.Journal of Food Quality,2018,(35):1-7