反復凍融胎牛血清有什么影響

實(shí)驗室一次用不完的血清會(huì )接著(zhù)冷凍是否會(huì )影響血清的品質(zhì)呢？其實(shí)反復凍融對蛋白的活性肯定會(huì )有一定的影響，因此，如果幾次內用不完，應盡量分裝使用。

曾有研究發(fā)現，血清凍融三次，對腫瘤標志物的濃度影響不大1，對于血漿，有報道在短時(shí)間內反復凍融三次，對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。重要的是一篇西北民族學(xué)院的文章，《反復凍融新生牛血清對促細胞生長(cháng)效應的影響》，作者針對SP2/0細胞，用MEM培養基和三批新生牛血清進(jìn)行培養。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細胞生長(cháng)曲線(xiàn)，根據公式t =T/A , A=log2
Y/X計算細胞倍增時(shí)間（t 為細胞倍增時(shí)間， Y 為細胞峰值前1 d 的細胞數， X 為接種細胞數， T 為細胞生長(cháng)時(shí)間）。結果顯示：選用的三批新生牛血清在反復凍融 28 次時(shí)， 血清促細胞生長(cháng)的大增殖量變化不大，均高于1×106/mL, 但是血清促細胞生長(cháng)的倍增時(shí)間在反復凍融 20次時(shí)延長(cháng)， 即血清促細胞繁殖一代所需的時(shí)間在凍融次數達到 20 次時(shí)顯著(zhù)增加。筆者觀(guān)察了一下該文章的結果列表，發(fā)現在凍融20次之前，細胞倍增時(shí)間延長(cháng)2-3小時(shí)不等，20次時(shí)，則延長(cháng)3-4小時(shí)?？梢?jiàn)，影響還是比較顯著(zhù)的。該文章的局限是針對新生牛血清，而沒(méi)有對胎牛血清進(jìn)行測試。

國外有人對大鼠血清中的18種化學(xué)成分進(jìn)行了檢測，發(fā)現反復凍融3次對其中的14種成分沒(méi)有顯著(zhù)影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有一些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以?xún)取?

總而言之，如果能避免牛血清的反復凍融，及時(shí)分裝，那是理想的。如果在短時(shí)間內有幾次反復凍融，也不于擔心。但是，對于胎牛血清，還有一個(gè)問(wèn)題，是反復凍融增高了血清產(chǎn)生沉淀或渾濁的風(fēng)險。因為血清在融化時(shí)，冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的，局部可能因蛋白濃度過(guò)高而產(chǎn)生沉淀。同時(shí)，如果血清內含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀4，等到血清再融化時(shí)，沉淀就顯現出來(lái)了。所以，血清的質(zhì)量也非常重要。