如何去評價(jià)和選擇支原體檢測試劑盒

要選一款合適的支原體檢測試劑盒，有如下幾個(gè)評價(jià)指標：

1. 靈敏度。

靈敏度常用支原體基因組的拷貝數或支原體菌株的CFU表示。

2. 特異性和廣譜性。

質(zhì)量好的試劑盒應檢測的支原體物種越多越多，并且特異性強，即只針對支原體，不針對其他細菌等微生物，沒(méi)有交叉反應。

3. 穩定性。

凍干粉比液體試劑的穩定性高。

4. 樣本類(lèi)型及樣本處理。

一款好的試劑盒，會(huì )標出它適合的樣本類(lèi)型，也會(huì )說(shuō)明如何處理樣本。要注意有的樣本含有抑制PCR反應的物質(zhì)，因此需要處理。

5. 對照品。

一個(gè)好的試劑盒，會(huì )帶有陽(yáng)性對照和內控對照。內控對照是用于監測PCR是否正常。如果樣本含有抑制PCR的物質(zhì)，則內控對照的條帶會(huì )發(fā)生缺失。有嚴重支原體污染的樣本由于樣本中的支原體對內控對照產(chǎn)生了競爭性抑制，因此支原體條帶越強，內控條帶越弱（下圖）。

圖. 1. 100 bp DNA Ladder；2. 陰性對照，有內控條帶；3. 陽(yáng)性對照，有支原體陽(yáng)性條帶；4. 樣本有PCR抑制劑；5.陰性樣本；6.陽(yáng)性樣本，支原體污染較輕；7.陽(yáng)性樣本，支原體污染較重。圖片來(lái)自Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor®GeM Advance支原體檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)

但支原體核酸檢測法（NAT）并沒(méi)有載入我國藥典。我們藥典的是支原體培養法和DNA染色法。但2018年《中國藥事》第8期上，中國食品藥品檢定研究院刊發(fā)了一篇文章——《支原體檢查的核酸檢測方法及方法學(xué)驗證的思考》，提出提出要與接軌，逐漸推進(jìn)NAT的開(kāi)展，因其“具有快速、靈敏、便捷等特點(diǎn)”。

歐洲藥典規定，核酸法如替代培養基，核酸法的靈敏度需達到10 CFU·mL-1；如替代DNA染色法，核酸法的靈敏度需達到100 CFU·mL-1。該文也提出，需對NAT進(jìn)行特異性、低檢出限和耐用性的驗證。

因此，對于需要NAT法檢查支原體的生物制品和細胞治療產(chǎn)品企業(yè)，可選擇試劑盒已經(jīng)驗證并提供有參比物質(zhì)的廠(chǎng)家，盡管后續仍需按照待測樣本類(lèi)型進(jìn)行方法的適用性驗證，并同步開(kāi)展藥典方法的平行檢測研究，但已為NAT法檢查支原體帶來(lái)極大的方便。

Minerva Biolabs公司是著(zhù)名的微生物污染控制公司，創(chuàng )始人來(lái)自于德國的羅伯特·科赫微生物研究所。其支原體檢測和祛除產(chǎn)品，在世界上居于較高位置。其中提供的用于藥品或生物制品企業(yè)過(guò)程控制的試劑盒和標準品如下：

（qPCR法）支原體檢測試劑盒

英文品名： Venor®GeM qEP

貨號與規格： 11-9025，25 tests/盒

11-9100，100 tests/盒

11-9250，250 tests/盒

（PCR法）支原體檢測試劑盒

注：不含聚合酶

英文： Venor® GeM Classic

貨號與規格： 11-1025，25 tests/盒

  11-1050，50 tests/盒

  11-1100，100 tests/盒

  11-1250，250 tests/盒

10CFU支原體靈敏度標準品

品名：10CFU™ Sensitivity Standards

100CFU支原體靈敏度標準品

品名：100CFU™ Sensitivity Standards

注意：

使用時(shí)，應嚴格遵循說(shuō)明書(shū)操作流程。任何偏離可能會(huì )造成結果誤差。

加入100CFU標準品的樣品不能超濾濃縮，否則會(huì )導致結果不可靠。

100CFU/ml不能稀釋為10CFU/ml，因支原體存在集聚現象，在溶液中非均一狀態(tài)。

上海締一生物生物科技有限公司作為Minerva公司中國區總代理，十幾年來(lái)，不斷為中國生物研究實(shí)驗室，以及眾多生物制品企業(yè)，提供了完整高效的支原體等微生物檢測及祛除解決方案。如有任何需求，可與我們聯(lián)系。