如何能真正有效的殺死支原體

現在，市面上的支原體清除劑大多是抗生素類(lèi)的，主要是三種：四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內酯類(lèi)和喹諾酮類(lèi)。它們對支原體的清除作用主要是抑制，而非直接殺死支原體。因此它們的效果不能持久，還會(huì )產(chǎn)生支原體的耐藥和細胞毒。要想真正有效的殺死支原體，只有德國Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產(chǎn)品。

      Mynox®取自枯草桿菌發(fā)酵后的提取物。由于支原體沒(méi)有細胞壁，只有簡(jiǎn)單的質(zhì)膜。Mynox®基于生物物理原理，只與支原體膜特異性結合，改變支原體膜的通透性，導致支原體破裂死亡，而哺乳動(dòng)物細胞能迅速返回它的原來(lái)形態(tài)，并保持正常的增殖速率。直至今日，Mynox®還沒(méi)有顯示任何導致正常細胞特性的改變。

     注意：Mynox®用于清除細胞培養和病毒培養以及生物樣本中的支原體和無(wú)膽甾原體，僅限于基礎研究使用。

下面，簡(jiǎn)單介紹一下Mynox®及其用法：

Mynox®：無(wú)菌即用型，pH7.4，220µl/管，每管用1次

貨號#10-0200      2 管

貨號#10-0500      5 管

貨號#10-1000      10 管                      

2-8°C保存。室溫運輸

      建議采用DMEM或RPMI 1640培養基，5%FCS。如果清除病毒中的支原體，應使用無(wú)血清培養基。如果是貼壁細胞，應用胰酶消化，把細胞打散為單細胞，保證細胞與Mynox®充分接觸，從而更有效地殺除支原體。

Mynox®的細胞毒效應在10%~80%，依賴(lài)于作用時(shí)間長(cháng)短。通常能保證有充分存活的細胞應用于繼續培養。支原體的高清除率帶來(lái)更高的細胞增殖速率，能夠彌補細胞毒帶來(lái)的損失。

Mynox®用法：

1、貼壁細胞

150px培養皿中，先后加2.8ml培養基（5%FCS），Mynox®200 µl，2 ml 細胞（1x104~1x105）。細胞繼續培養2小時(shí)，即完成治療，即可換液。治療可持續3-8天，不過(guò)需注意觀(guān)察細胞狀態(tài)。

2、懸浮細胞

無(wú)菌離心管里先后加1.6ml 含0.125%胰酶和5mM EDTA PBS，Mynox®200 µl，1.6 ml細胞（細胞數1x104~ 1x105，10%FBS）。室溫孵育30分鐘即完成治療，即可將細胞離心換液。（注意：胰酶作用是防止細胞聚集。如不用胰酶解離細胞，可用培養基代替胰酶。要保證細胞與Mynox®混合物的總體積為3.4ml，必要時(shí)添加PBS。）治療也可持續3天，不過(guò)要觀(guān)察細胞狀態(tài)。

3. 無(wú)包膜病毒

      1.5ml無(wú)菌離心管中加入1ml無(wú)血清培養基、100 µl Mynox®、125 µl病毒株和FBS（<8%）。輕輕搖勻，室溫培養2小時(shí)后即完成治療?？捎门囵B基將Mynox®稀釋為1:10，終止反應。注意：在病毒感染宿主細胞前，應檢查宿主細胞系是否有支原體污染。

4、包膜病毒

　　注意：起始病毒滴度應>106TCID50，以保證有足夠病毒能繼續進(jìn)行下游培養。

      15ml無(wú)菌離心管中加入4.4ml無(wú)血清培養基、100µlMynox®、0.5ml病毒株和FCS（<8%）

混合物總體積為5 ml。輕輕搖勻，室溫培養30分鐘即完成治療。終止方法同上。注意：在病毒從細胞培養液中收集時(shí)，可多次使用這個(gè)支原體去除過(guò)程，以確保所有支原體已被清除。

支原體清除效果鑒定：

治療后細胞或病毒可正常傳代四次后再檢測。因為支原體被殺死后，會(huì )釋放游離DNA到培養液中，此時(shí)檢測會(huì )有假陽(yáng)性。推薦使用Minverva公司高敏感的Venor®Gem支原體PCR檢測試劑盒。

德國Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產(chǎn)品為上海締一生物生物科技有限公司代理。清除支原體的好產(chǎn)品選Mynox®。