牛血清富含細胞生長(cháng)必要的因子,但牛血清在生產(chǎn)制作中也存在引入外源因子的風(fēng)險。所以在遵循牛血清生產(chǎn)的GMP規范也要對其做全面的質(zhì)控檢測。
外源因子主要包括微生物、內毒素和病毒抗體等。
01、微生物
1. 細菌和真菌
其中細菌又分為需氧菌和厭氧菌。
這兩種微生物的檢查又稱(chēng)為“無(wú)菌檢查”?,F多采用培養法。我國藥典通則1101和美國藥典USP<71>有關(guān)于無(wú)菌檢查方法的說(shuō)明。
牛血清在生產(chǎn)過(guò)程中,經(jīng)0.22mm孔徑的濾膜過(guò)濾,可*祛除細菌和真菌,因其大?。?/span>1mm。
2. 支原體
支原體大小介于0.1mm~0.3mm
牛血清在生產(chǎn)過(guò)程中,經(jīng)0.1mm孔徑的濾膜三次過(guò)濾,可*祛除支原體。
支原體檢查也采用培養法,可參看我國藥典通則3301和美國藥典USP<63>
3. 病毒
病毒檢查包括細胞培養法及熒光抗體檢測。細胞培養法包括細胞病變效應和血吸附檢查。檢測多為導致牛常見(jiàn)傳染病的病毒,如牛副流感病毒3 型(PI3)、牛腺病毒(BAV-3 ) 、牛細小病毒(BPV ) 以及牛病毒性腹瀉病毒(BVD)等。其中,BVD以其發(fā)病率高,亞型不具有細胞病變效應而尤其受到重視。
02、內毒素
內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁成分,主要為脂多糖。內毒素對細胞產(chǎn)生刺激,直接導致細胞凋亡,因此內毒素被用來(lái)進(jìn)行血清評級。特級胎牛血清內毒素要求≤10EU/ml。但內毒素濃度越低越好,尤其是對于一些“嬌氣”的細胞。
內毒素的檢測是采用鱟試劑法。
03、病毒抗體
動(dòng)物感染病毒后,會(huì )刺激機體產(chǎn)生抗體。感染治愈后,抗體會(huì )長(cháng)期存在。病毒抗體會(huì )影響疫苗細胞苗的毒價(jià)。如豬瘟細胞苗的生產(chǎn),就不能用含BVD抗體的牛血清,因該抗體與豬瘟病毒抗原之間會(huì )發(fā)生特異性交叉反應。2020版中國藥典也規定用于乙腦疫苗生產(chǎn)的新生牛血清,應為乙腦抗體陰性。