胎牛血清是細胞培養重要的培養基且不可替代,它是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。此時(shí)胎牛各臟器正處生長(cháng)分化階段,血中含有豐富的生長(cháng)發(fā)育因子,非常適合各種細胞的培養。
因此,如何在使用過(guò)程中保護這些因子的活性,達到大的細胞培養效果,就需要正確地使用胎牛血清。
正確地使用胎牛血清可分為以下四個(gè)方面:
1. 正確儲存,避免反復凍融
1) 血清在-20°C凍存。
2) 血清避免反復凍融,以免降低因子活性。如一次用不完,應進(jìn)行分裝。
3) 血清和培養基應盡可能“現用現配”,配好的培養液,應于一周內用完。
4)血清避免在4°C或更高溫度靜置過(guò)久,否則會(huì )破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。
2. 正確的融化
上流行的【血清融化三步法】可大限度地保存血清中因子的活性,不會(huì )產(chǎn)生沉淀,同時(shí)能縮短血清融化時(shí)間。具體如下:
3. 關(guān)于胎牛血清的滅活
真正的胎牛血清因為胎牛沒(méi)有形成有效補體,如果針對補體滅活的話(huà),就不需要。其他情況根據實(shí)驗設計來(lái)決定。
4. 胎牛血清的濃度
胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養基中,混合后配成*培養基。
曾有文獻報道,不同胎牛血清濃度對細胞存在一定的影響,尤其是干細胞和原代細胞。具體jia濃度需要用戶(hù)根據自己的實(shí)驗來(lái)確定,以既保證培養的效果,又避免血清的浪費。