放射性同位素32P常用于細胞信號的轉導研究。由于磷酸化是常見(jiàn)的蛋白修飾和信號轉導形式,因此,32P標記的磷酸鹽可摻入到被磷酸化修飾的蛋白中而被檢測到,從而反映出磷酸化蛋白的濃度。在這一過(guò)程中,具體位點(diǎn)的磷酸化以及上游的作用信號都是待驗證的因素。在該研究中,模型細胞、帶有突變位點(diǎn)的轉染質(zhì)粒、捕獲蛋白和磷酸化蛋白的標簽抗體,以及放射自顯影、電泳和蛋白免疫印跡是一連串的研究工具和方法。終顯示為在這個(gè)位點(diǎn)上的磷酸化激活的確證(如下圖)。
該實(shí)驗避免了使用抗磷酸化的抗體,避免了因抗體的親和力不強導致的實(shí)驗失敗。而放射性同位素又具有很高的靈敏度,因此盡管具有放射性,在許多領(lǐng)域仍有應用。
在這類(lèi)實(shí)驗中,由于要向細胞培養液中加入32P標記的磷酸鹽,以摻入到細胞中,因此培養基中需要祛除固有的磷酸鹽,同時(shí)又保留細胞所需的其他營(yíng)養(如生長(cháng)因子、細胞外基質(zhì)等)。由于胎牛血清含有各類(lèi)小分子,因此過(guò)濾掉小分子的透析胎牛血清常用于該類(lèi)實(shí)驗中的細胞培養。
北京締一生物公司代理的Ausbian®透析胎牛血清選自澳洲低毒素批次的特級胎牛血清,經(jīng)半透膜透析而成,祛除了10Kda以下包括磷酸鹽在內的小分子,因而可更好地用于同位素摻入試驗。
Ausbian®透析胎牛血清有100ml/瓶和500ml/瓶不同規格,每個(gè)批次提供完整的檢測報告。全程冷鏈運輸,不出現凍融現象,保證質(zhì)量不受影響。
Ausbian®透析胎牛血清出廠(chǎng)前的質(zhì)檢包括:
1)理化檢查(如pH值、血紅蛋白、總蛋白、白蛋白、球蛋白、IgG和內毒素)
2)無(wú)菌檢查,包括細菌、真菌、支原體檢查
3)病毒檢查,包括牛藍舌病毒、牛病毒性腹瀉病毒等十二項指標
4)生化檢查,包括葡萄糖、甘油三酯和膽固醇
5)促細胞生長(cháng)試驗
6)BVD1型和2型抗體檢查
總之,對于上述提到的一些特殊的細胞實(shí)驗,應選用質(zhì)量合格的透析胎牛血清來(lái)培養細胞,不干擾同位素摻入試驗,又能保證細胞的培養效果。