支原體檢測的核酸法,已廣泛應用于細胞支原體篩查和生物制品企業(yè)的生產(chǎn)放行檢測中。
但在使用PCR方法檢測支原體之前,由于有些待檢樣品的成分過(guò)于復雜,或含有的某些成分會(huì )抑制PCR反應的進(jìn)行,因此需要使用『支原體DNA提取試劑盒』提前做DNA的提取工作。
對于生物藥或需遵循藥典的樣本,也由于樣品基質(zhì)可能會(huì )影響檢測的靈敏度,因此需要樣本做DNA抽提處理,實(shí)現核酸法gao的靈敏度。
這里向您推薦德國MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒
英文品名:
Venor®GeM Sample Preparation Kit
該試劑盒已經(jīng)過(guò)多方廣泛驗證,有很多引用文獻;
它已達到歐洲藥典標準,可用于PCR或qPCR檢測支原體的方法學(xué)驗證。
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產(chǎn)品信息:
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產(chǎn)品特點(diǎn)
1)符合歐洲藥典的要求。
2)采用離心管柱的方法,全程只需30分鐘。
2)從細胞上清和生物制品中,均可分離支原體DNA。
3)洗脫DNA純度高,體積50μl,保證PCR大的靈敏度。
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操作步驟
四步法:
1)細胞裂解
2)DNA吸附到核酸純化柱上
3)去除殘留污染物和抑制劑
4)DNA洗脫
試劑盒組分:
Spin columns(核酸純化?。?/p>
Collection tubes(收集管)
Conditioner液
Binding Buffer液
Buffer A1液
Buffer A2液
Buffer E液
操作示意圖:
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所需其他材料及儀器:
Venor®GeM Classic Kit(貨號11-1025)
以保證操作過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題。
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注意事項:
1. 支原體DNA 提取試劑盒一次可從多含有1X 106 細胞/ml 的細胞上清中直接分離DNA。
2. 富含蛋白的樣本(蛋白含量>10mg/ml)可能需要蛋白酶K 處理后,再抽提DNA。
3. 此試劑盒不適于提取真核細胞組織的DNA。
4. 若在提取DNA時(shí)加入了內控DNA對照,則在支原體核酸法檢測時(shí)不需要再加內控對照。我們推薦使用對照,以驗證結果的可靠性,也有助于排除故障。
5. 不要使用其他酒精來(lái)替代乙醇,它將導致核酸產(chǎn)量的下降。
6. 緩沖液E(Buffer E)的預熱,會(huì )顯著(zhù)改善核酸的產(chǎn)量。