胎牛血清主要的作用就是提供基本的營(yíng)養物質(zhì)以及提供接觸和伸展因子,有效避免細胞貼壁受到機械的損傷。本文締一生物為您分析科研人員,在哪幾種情況下對應對胎牛血清內毒素格外留意。
1.養干細胞時(shí),干細胞對內毒素非常敏感,如果血清中內毒素≥3EU/ml時(shí),干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過(guò)提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。
2.養免疫細胞時(shí),過(guò)高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。
3.基因敲除相關(guān)的細胞實(shí)驗,培養的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導細胞衰老或凋亡的試劑,都會(huì )讓后續的實(shí)驗結果“失之毫厘,謬以千里”。在準備血清和其他試劑時(shí),選擇極低的內毒素(hao≤1EU/ml),對實(shí)驗至關(guān)重要;
4.原代培養、雜交瘤融合、細胞轉染,或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內皮等難養細胞的擴增,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此,挑選更低的內毒素,是保證實(shí)驗順利的第yi步。
5.實(shí)驗室有些細胞,需要長(cháng)期培養、長(cháng)期凍存,或者經(jīng)常復蘇、經(jīng)常培養的,血清會(huì )經(jīng)?;蜷L(cháng)時(shí)間作用于細胞。為保證細胞的健康,都應該選用更低內毒素的血清,以避免內毒素長(cháng)久對細胞的毒性影響。
總之,血清中內毒素含量過(guò)高,更容易導致細胞“亞健康”,造成數據不準,或細胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導致試驗中斷失敗。血清中的內毒素越低越好。
全qiu細胞培養學(xué)會(huì )均依據內毒素對血清的品質(zhì)進(jìn)行分級和命名。
內毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級胎牛血清;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級胎牛血清;
當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標準級胎牛血清;
目前,由于同一廠(chǎng)家,不同批次的血清,內毒素數值也可能有較大差異,因此很多血清廠(chǎng)家在名稱(chēng)上已不注明級別。但使用者仍可通過(guò)檢測報告,自行甄別挑選。)