從以往PCR對支原體污染的檢測報道看方法驗證的必要性

以PCR為代表的核酸擴增技術(shù)自1988年發(fā)明以來(lái)，已廣泛應用于科研和臨床，但用于生物制藥則較晚，這是因為標準化的建立需要一定的時(shí)間。

國外已有不少藥廠(chǎng)將PCR或qPCR用于工業(yè)放行檢測中的支原體檢查。PCR的靈敏度、特異性、適用性和可靠性具有達到藥典標準的潛在可能。但需要按步驟和程序開(kāi)展方法驗證。

有作者指出，有些PCR法在反應條件及引物設計上，仍需不斷改良以提高其檢測效率。作者曾用半巢式PCR檢測70份支原體污染的樣本（主要為生物制品生產(chǎn)用細胞基質(zhì)），結果只檢出60份，說(shuō)明PCR要應用于工業(yè)檢測支原體，其首要因素是要提高檢測限。見(jiàn)2015年《生物制品學(xué)雜志》中的《中國生產(chǎn)用細胞基質(zhì)污染支原體類(lèi)型的分析及豬鼻支原體特異性檢測方法的初步建立》。

需要指出的是，對于工業(yè)藥廠(chǎng)，如要采用PCR方法進(jìn)行支原體污染的檢查，如方法需要驗證，可使用minerva biolabs提供的現成的支原體標準品。如簡(jiǎn)化驗證，可使用現成的已經(jīng)過(guò)驗證的支原體PCR或qPCR檢測試劑盒。并且支原體DNA需要經(jīng)過(guò)抽提才能進(jìn)行檢測，以保證相應的靈敏度。

下面小編介紹一下商業(yè)試劑盒的特點(diǎn)：

1）使用靈活

    *  與幾乎所有商用循環(huán)儀兼容

    *  可選擇常規PCR或實(shí)時(shí)熒光定量PCR

2）高性能

    *  高耐用性、高靈敏度和高特異性（>100種支原體物種可檢測）

    *  符合EP 2.6.7 / USP <71> / JP G3標準。提供內部擴增對照，

          用于過(guò)程監測。有產(chǎn)品驗證報告

3）使用方便

   *  預先分裝PCR mix（25個(gè)反應），保證長(cháng)期穩定性

   *  組分為凍干粉形式，使運輸與存儲更簡(jiǎn)單

   *  探針檢測，結果清晰（qPCR）

可考慮的標準品需要經(jīng)過(guò)嚴格標定。需考慮有聲譽(yù)和質(zhì)控報告的標準品廠(chǎng)家。下面介紹某廠(chǎng)家標準品類(lèi)別如下：

配套用于過(guò)程驗證和檢測的標準品（EP2.6.7/USP<71>/JP G3）：

*  10CFU™靈敏度標準品，包括所有EP和JP列舉的支原體物種

*  100CFU™靈敏度標準品

*  支原體和細菌基因組DNA（特異性驗證用）

*  PCR定量標準品（10⁸拷貝DNA/管）

更多見(jiàn)締一生物提供的相關(guān)內容。