支原體qPCR檢測的結果詮釋

支原體qPCR檢測不僅用于細胞培養的支原體篩查，也用于生物制品行業(yè)的放行檢測，但前提是要有方法驗證。

無(wú)論是否遵循藥典，支原體qPCR檢測的結果判定都需要一定的標準。下面小編結合德國MB廠(chǎng)家的支原體qPCR說(shuō)明書(shū)及相關(guān)文件，給予進(jìn)一步的闡釋。下面小編結合德國MB廠(chǎng)家的支原體qPCR說(shuō)明書(shū)及相關(guān)文件，給予進(jìn)一步的闡釋。

一、熒光檢測通道的結果詮釋

用MB公司的qPCR試劑盒檢測時(shí)，qPCR儀的FAM通道檢測支原體熒光信號，HEX通道檢測內控對照（簡(jiǎn)稱(chēng)IC）的熒光信號（如沒(méi)有HEX通道，可用VIC通道）。IC是用于監測qPCR反應是否正常。對于這兩個(gè)通道，Ct＜40為陽(yáng)性結果。Ct≥40為陰性結果。支原體DNA和IC存在信號的競爭性抑制。

在陰性對照和陽(yáng)性對照均結果正常的前提下，

根據FAM^TM通道和HEX通道的檢測結果，可判別樣品是否有支原體污染。

具體見(jiàn)下表：

表1. FAM™通道 (支原體) 和HEX™ (IC) 通道的結果詮釋

需要說(shuō)明的是：

內控對照可在支原體DNA抽提時(shí)加入。如果結果無(wú)效，則說(shuō)明抽提失敗，或者qPCR存在抑制。

如果內控對照是在qPCR反應時(shí)加入，則說(shuō)明qPCR存在抑制。

二、對照與樣品的結果詮釋?zhuān)?/span>適用于符合EP/JP的檢測）

對于遵循EP/JP的檢測，具體數據詮釋見(jiàn)表2。

表2.

表2結果判定的前提是：qPCR檢測試劑盒符合EP/JP的要求。

三、MB公司支原體qPCR應選擇質(zhì)量較好，符合藥典要求的試劑盒，如德國MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒(經(jīng)典法)(英文名：Venor®Gem qEP)經(jīng)過(guò)廠(chǎng)家全面的方法驗證，符合歐洲藥典/日本藥典要求，

適合細胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢。

需注意樣本要先做DNA抽提，再進(jìn)行qPCR檢測。

MB還提供用于PCR/qPCR方法驗證的配套的支原體10CFU、100CFU菌株標準品、特異性驗證用支原體基因組DNA和細菌基因組DNA、支原體DNA定量標準品（基因組拷貝數經(jīng)嚴格標定）。