細胞被支原體污染后的清除辦法

更新時(shí)間：2021-01-27 | 點(diǎn)擊率：903

概述：在細胞培養過(guò)程中，支原體感染發(fā)生率達到63%，因而細胞培養過(guò)程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。本文締一生物為您分析細胞被支原體污染后的清除策略。

細胞培養中常遇見(jiàn)的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。

說(shuō)起支原體污染，估計細胞培養的同學(xué)就開(kāi)始犯愁了，細胞培養的老手都知道，支原體污染非常不易察覺(jué)。有的實(shí)驗室被支原體污染后，如果不進(jìn)行有效*的支原體清除，該實(shí)驗的細胞培養很難進(jìn)行下去，細胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑，無(wú)法進(jìn)行正常實(shí)驗，有的實(shí)驗室甚至只能指望換細胞間。那么怎樣才能有效檢測并清除支原體污染呢?

支原體污染的來(lái)源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實(shí)驗器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細胞的原始組織或器官的污染。細胞培養工作中，主要從以下幾個(gè)方面來(lái)預防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴格實(shí)驗操作；細胞培養和器材要保證無(wú)菌；在細胞培養中加入適量的抗生素。

1、支原體檢測

熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴增反應的實(shí)時(shí)監測，簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。

優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高、特異性強。

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果。

③檢測結果可定量。

④操作簡(jiǎn)便。

缺點(diǎn)：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。（可用培養法做補充驗證）

②不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針?lè )z測），依據操作步驟的細微差別，

分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

2、環(huán)境空間消毒方案

試驗臺、超凈臺、培養箱、液氮罐、移液器、門(mén)把手、電話(huà)等細胞培養環(huán)境

被支原體污染，可引起細胞的污染。應定期對工作區域進(jìn)行消毒。

德國MB生產(chǎn)的Mycoplasma-offTM噴霧劑，或濕巾擦拭 5-10分鐘清除，對支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子祛除確切有效。無(wú)殘留, 無(wú)腐蝕, 無(wú)致癌性，操作簡(jiǎn)單方便。