細胞培養實(shí)驗室對支原體的預防

細胞培養實(shí)驗室發(fā)生支原體污染的風(fēng)險較高。支原體天然存在于周?chē)諝猓馊苣z形式）、人的體表（攜帶和隱藏）以及未*消毒的器物表面，而細胞培養基中由于含有血清，營(yíng)養豐富，很容易導致支原體的快速繁殖。

支原體的污染肉眼不易察覺(jué)，直到嚴重的階段才會(huì )出現培養基變色、細胞異常等情況。支原體可造成細胞代謝改變，基因表達譜發(fā)生變化，從而嚴重干擾實(shí)驗進(jìn)程。

因此，在細胞培養過(guò)程中，定期監測是否存在支原體污染，及時(shí)預防支原體污染是每個(gè)科研人員的工作之一。下面筆者給您推薦幾個(gè)支原體防控的產(chǎn)品，僅供參考。這些都是德國Minerva Biolabs公司出品，在國際期刊上也具有很高的引用率。

一、環(huán)境中的支原體污染的預防和清除

Mycoplasma OffTM是一款支原體噴霧劑，用于清除工作區域中的支原體。它起效快（10秒鐘即起效），安全無(wú)毒，對細胞不會(huì )產(chǎn)生不良影響，噴灑后，可再用干凈紙張擦拭即可。對于工作臺以及各種細胞操作的器具表面，均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設備，可使用Mycoplasma OffTM濕巾擦拭。

 

細胞孵箱、水浴鍋等有溫水的地方，也容易滋生支原體、細菌等。在循環(huán)水中倒入Water ShieldTM（1：200稀釋?zhuān)┘纯捎行У仡A防滋生，效果可持續1個(gè)月左右。

 

Mycoplasma OffTM對許多細菌、病毒也有預防和殺滅作用。

二、細胞培養中支原體污染的祛除

通常來(lái)說(shuō)，被污染的細胞應該丟棄，以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞，可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往別的品牌的支原體清除劑，其實(shí)只是抑制劑，它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成，但無(wú)法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結合，破壞膜通透性，導致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox®一般在2-3個(gè)小時(shí)即可完成清除任務(wù)。

 

Mynox Gold®是Mynox®的升級版，它通過(guò)四個(gè)療程產(chǎn)生作用。每個(gè)療程即細胞傳一代。它除了包括Mynox®，也包含復合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對支原體的抗生素成分，但也容易產(chǎn)生耐藥。Mynox Gold®將Mynox®和抗生素結合，即結合了二者的優(yōu)點(diǎn)，又去除了二者的不足，因為有的細胞對Mynox®的治療不太適應，而Mynox Gold®要比Mynox®更加溫和，對細胞的毒性效應極小，因而更適用于脆弱的不太好養的細胞。

三、細胞培養中支原體污染的預防

Zell ShieldTM直譯過(guò)來(lái)是細胞盾牌，它不僅能殺菌，還可抑制支原體的蛋白和DNA合成，因而能避免支原體的污染。使用時(shí)按1：100的比例加到培養基中，即可使用。它是復合抗生素成分，支原體耐藥的出現幾率很低。

 

四、細胞培養中支原體污染的監測

可使用MB公司出品的Venor® Gem系列，是一步法試劑盒（Venor® Gem OneStep），它采用靈敏的PCR方法，能識別常見(jiàn)的至少二十七種支原體。所有試劑均在一管內，為穩定的凍干粉形式，用緩沖液溶解后可直接使用。細胞上清取2l即可完成支原體的篩查。

總之，支原體雖然發(fā)生率高，但可放可控。以上僅僅列舉的是實(shí)驗室的情況，對于生物制藥企業(yè)，如果是病毒液中發(fā)現支原體的污染，也可以采用Mynox®進(jìn)行清除?？傊?，支原體的檢測和預防已成為一項常規操作，這對保障細胞學(xué)實(shí)驗的順利進(jìn)行，是非常重要的。