培養細胞時(shí)該如何進(jìn)行細菌檢測

細胞培養是生物醫學(xué)研究的常見(jiàn)操作，其中避免細菌污染是重要一環(huán)。對于生命科學(xué)實(shí)驗室，早期就檢查培養細胞中是否存在細菌污染，對于解決細胞污染問(wèn)題，是一個(gè)合理的選擇。

據估計，高達5%的細胞培養物發(fā)生過(guò)細菌污染，并且缺乏肉眼可見(jiàn)的細菌污染跡象，如渾濁、培養基突然變色(酚紅)或出現微生物顆粒。此外，細菌可對標準抗生素(如青霉素/鏈霉素)表現出耐藥性，并直接影響細胞代謝、生長(cháng)和分化。因此，采用一款快速、靈敏、可靠的細菌檢測試劑盒，就顯得尤為必要。

 

 

德國MB公司專(zhuān)門(mén)設計的細菌PCR檢測Kit可以直接檢測細胞培養、細胞培養衍生的生物制劑和細胞培養基中的細菌污染。下面小編介紹一下。

一、產(chǎn)品信息

 

二、產(chǎn)品描述

該試劑盒采用PCR方法，用于檢測生物樣品（包括細胞培養物和病毒貯存液）中是否存在細菌。

該試劑盒針對細菌16S rRNA基因高度保守區。根據序列一致性，可至少檢測污染細胞常見(jiàn)的45種細菌屬，具體如下：

放線(xiàn)菌Actinomyces

芽孢桿菌Bacillus

腸球菌Enterococcus

埃希氏桿菌Escherichia

梭菌Fusobacterium

克雷伯氏菌Klebsiella

乳酸桿菌Lactobacillus

微球菌Micrococcus

分枝桿菌Mycobacterium

假單胞菌Pseudomonas

卟啉單胞菌Porphyromonas

普氏菌Prevotella

沙門(mén)氏菌Salmonella

沙雷氏菌Serratia

軍團菌Legionella

葡萄球菌Staphylococcus

鏈球菌Streptococcus

消化鏈球菌Peptostreptococcus

該試劑盒靈敏度達到100個(gè)基因組拷貝/PCR反應。

說(shuō)明：該試劑盒只用于科研，不用于工業(yè)QC。

三、試劑盒包括：

凍干型PCR mix：含引物/核苷酸/內控對照DNA /熱啟動(dòng)聚合酶；

復溶緩沖液；

凍干型陽(yáng)性對照DNA；

PCR級水。

四、樣本處理

樣本不用提DNA，只需熱滅活（95 °C 5分鐘）；

樣本需不含抗生素，如含抗生素，則細胞應在不含抗生素的培養基中培養至少一代后再檢測。

五、反應體系

25μl反應體系：含20 μl PCR Mix和5μl模板。

六、結果判定

PCR結束后在瓊脂糖電泳上跑膠。典型結果如下圖所示。

 

圖. 電泳分析結果。左側為內控對照條帶，在140bp，用于排除假陰性。如有內控條帶，則顯示PCR反應正常，樣本中無(wú)PCR抑制成分。右側為目的條帶，在467bp左右。如有目的條帶，則提示有細菌污染。

七、產(chǎn)品引用文獻

Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.