細胞培養是生物醫學(xué)研究的常見(jiàn)操作,其中避免細菌污染是重要一環(huán)。對于生命科學(xué)實(shí)驗室,早期就檢查培養細胞中是否存在細菌污染,對于解決細胞污染問(wèn)題,是一個(gè)合理的選擇。
據估計,高達5%的細胞培養物發(fā)生過(guò)細菌污染,并且缺乏肉眼可見(jiàn)的細菌污染跡象,如渾濁、培養基突然變色(酚紅)或出現微生物顆粒。此外,細菌可對標準抗生素(如青霉素/鏈霉素)表現出耐藥性,并直接影響細胞代謝、生長(cháng)和分化。因此,采用一款快速、靈敏、可靠的細菌檢測試劑盒,就顯得尤為必要。
德國MB公司專(zhuān)門(mén)設計的細菌PCR檢測Kit可以直接檢測細胞培養、細胞培養衍生的生物制劑和細胞培養基中的細菌污染。下面小編介紹一下。
一、產(chǎn)品信息
二、產(chǎn)品描述
該試劑盒采用PCR方法,用于檢測生物樣品(包括細胞培養物和病毒貯存液)中是否存在細菌。
該試劑盒針對細菌16S rRNA基因高度保守區。根據序列一致性,可至少檢測污染細胞常見(jiàn)的45種細菌屬,具體如下:
放線(xiàn)菌Actinomyces
芽孢桿菌Bacillus
腸球菌Enterococcus
埃希氏桿菌Escherichia
梭菌Fusobacterium
克雷伯氏菌Klebsiella
乳酸桿菌Lactobacillus
微球菌Micrococcus
分枝桿菌Mycobacterium
假單胞菌Pseudomonas
卟啉單胞菌Porphyromonas
普氏菌Prevotella
沙門(mén)氏菌Salmonella
沙雷氏菌Serratia
軍團菌Legionella
葡萄球菌Staphylococcus
鏈球菌Streptococcus
消化鏈球菌Peptostreptococcus
該試劑盒靈敏度達到100個(gè)基因組拷貝/PCR反應。
說(shuō)明:該試劑盒只用于科研,不用于工業(yè)QC。
三、試劑盒包括:
凍干型PCR mix:含引物/核苷酸/內控對照DNA /熱啟動(dòng)聚合酶;
復溶緩沖液;
凍干型陽(yáng)性對照DNA;
PCR級水。
四、樣本處理
樣本不用提DNA,只需熱滅活(95 °C 5分鐘);
樣本需不含抗生素,如含抗生素,則細胞應在不含抗生素的培養基中培養至少一代后再檢測。
五、反應體系
25μl反應體系:含20 μl PCR Mix和5μl模板。
六、結果判定
PCR結束后在瓊脂糖電泳上跑膠。典型結果如下圖所示。
圖. 電泳分析結果。左側為內控對照條帶,在140bp,用于排除假陰性。如有內控條帶,則顯示PCR反應正常,樣本中無(wú)PCR抑制成分。右側為目的條帶,在467bp左右。如有目的條帶,則提示有細菌污染。
七、產(chǎn)品引用文獻
Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.