我們對培養細胞時(shí)用到的牛血清有什么要求？

細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養條件等），使之生存、生長(cháng)、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細胞培養都是一個(gè)不可少的過(guò)程，細胞培養本身就是細胞的大規?？寺?。細胞培養技術(shù)可以由一個(gè)細胞經(jīng)過(guò)大量培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)不可少的環(huán)節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。細胞培養技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過(guò)細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長(cháng)增殖等。

牛血清的質(zhì)量要求

（一）WHO公布的《用動(dòng)物細胞體外培養生產(chǎn)生物制品規程》中的要求

1. 牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國家，并應具備適當的監測系統。

2.有些國家還要求牛血清來(lái)自沒(méi)有用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料喂養的牛群。

3.要能證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4.血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌，保證無(wú)菌。

5.無(wú)細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無(wú)大腸桿菌噬菌體污染。

6.要求血清對細胞有良好的支持繁殖作用。

我國在對牛血清的質(zhì)量標準最早在2000年版《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準》中提出。包括物理性狀、總蛋白，血紅蛋白、細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素，支持細胞增殖檢查。2005版藥典頒布之后，小牛血清質(zhì)量標準被納入《中國藥典》2005年版 第三部 生物制品分冊。

科研實(shí)驗中，細胞的體外培養一直是一個(gè)重要環(huán)節。細胞要養好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細胞培養，尤其適合難養細胞，如：干細胞、肝細胞，神經(jīng)細胞，原代培養、細胞融合、轉染細胞等。

有下列情況者，對血清內毒素應格外留意篩選：

1.養干細胞時(shí)，干細胞對內毒素非常敏感，如果血清中內毒素≥3EU/ml時(shí)，干細胞很容易死亡。很多使用者，在血清在試用前，就通過(guò)提早審核該批次《檢測報告》，以決定是否入圍進(jìn)行試用。

2.養免疫細胞時(shí)，過(guò)高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細胞集落的形成等。

3.基因敲除相關(guān)的細胞實(shí)驗，培養的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài)，任何引導細胞衰老或凋亡的試劑，都會(huì )讓后續的實(shí)驗結果“失之毫厘，謬以千里"。在準備血清和其他試劑時(shí)，選擇極低的內毒素（最好≤1EU/ml），對實(shí)驗至關(guān)重要；

4.原代培養、雜交瘤融合、細胞轉染，或者肝細胞、神經(jīng)細胞、內皮等難養細胞的擴增，這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此，挑選更低的內毒素，是保證實(shí)驗順利的第一步。

5.實(shí)驗室有些細胞，需要長(cháng)期培養、長(cháng)期凍存，或者經(jīng)常復蘇、經(jīng)常培養的，血清會(huì )經(jīng)?；蜷L(cháng)時(shí)間作用于細胞。為保證細胞的健康，都應該選用更低內毒素的血清，以避免內毒素長(cháng)久對細胞的毒性影響。

總之，血清中內毒素含量過(guò)高，更容易導致細胞“亞健康"，造成數據不準，或細胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡，導致試驗中斷失敗。血清中的內毒素越低越好。