細胞培養技術(shù)指的是細胞在體外條件下的生長(cháng),在培養的過(guò)程中細胞不再形成組織(動(dòng)物)。培養物是單個(gè)細胞或細胞群。細胞在培養時(shí)都要生活在人工環(huán)境中,由于環(huán)境的改變,細胞的移動(dòng)或受一些其他因素的影響,培養時(shí)間加長(cháng),傳代導致細胞出現單一化型。
細胞培養過(guò)程中,由于實(shí)驗環(huán)境、操作者鼻腔口腔、實(shí)驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此,細胞發(fā)生支原體污染的頻率很高。據美國數據統計,細胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。
同時(shí),由于支原體直徑很小,僅在180nm~350nm之間,只有通過(guò)電鏡才能看到。因此,支原體污染不易被實(shí)驗者肉眼發(fā)覺(jué)。而支原體污染是個(gè)循序的過(guò)程,普通抗生素對其無(wú)效。因此,被支原體污染的細胞會(huì )持續受到影響,導致實(shí)驗數據不準確。
支原體污染不僅是細胞培養中需要克服的現象,而且是制藥、生物制品生產(chǎn)中需要加以避免的。支原體污染的影響是什么?
抑制細胞增殖達50%
●影響免疫反應
●影響病毒增殖和感染率
●引起染色體畸變和易位
●干擾雜交瘤技術(shù)使被污染細胞在HAT培養基更敏感
●在細胞壁上附著(zhù)支原體會(huì )改變細胞壁完整性。
●降低電穿孔轉染率達5%
總之,支原體污染影響細胞所有的代謝功能。
通常來(lái)說(shuō),被污染的細胞應該丟棄,以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞,以往別的品牌的支原體清除劑,其實(shí)只是抑制劑,它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成,但無(wú)法殺除。是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌,可與支原體膜特異性結合,破壞膜通透性,導致支原體膨脹破裂而死。