“ 破解細胞生長(cháng)慢，這幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)你注意了嗎？（下）“

今天我們書(shū)接上回，接著(zhù)講講另外3個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。

公共設備可能存在問(wèn)題

儀器的參數

也會(huì )影響細胞狀態(tài)

如果細胞不存在污染，培養體系沒(méi)有瑕疵、細胞初始狀態(tài)也沒(méi)有問(wèn)題，那么可以考慮公共儀器設備是否存在紕漏。

常見(jiàn)有水浴鍋溫度、室內溫度及濕度、培養箱參數、水浴鍋溫度等。

水浴鍋是細胞培養室常用的儀器，要定期用溫度計對其工作溫度進(jìn)行檢查，觀(guān)察是否存在溫度不準、溫度驟變的情況。另外要強調一點(diǎn)，水浴鍋也是常見(jiàn)的污染源之一，水浴鍋中的水最好使用無(wú)菌水，并定期做好清潔工作，推薦大家使用MB WaterShield，可以有效清除、預防水槽中的支原體，方便安全、省時(shí)省力省心。

 

細胞實(shí)驗室的溫度及濕度：儀器還是操作對溫度沒(méi)有特殊要求，維持舒適的溫度即可，比如18~26℃；過(guò)高的濕度會(huì )導致微生物的滋生，所以建議正常維持濕度在70%以下。應定期用溫度濕度測試儀對細胞實(shí)驗室進(jìn)行檢測，以防溫控系統出現故障。

培養箱參數：一般哺乳類(lèi)與禽類(lèi)細胞在體外培養的適宜溫度是37～38℃；大多數細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開(kāi)放式培養中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。但在實(shí)際操作過(guò)程中，細胞培養箱有可能會(huì )出現以下故障，影響細胞培養體系，進(jìn)而使細胞生長(cháng)變得緩慢：

• 溫度和溫度設定不準；

• 細胞培養箱濕度不能維持；

• 細胞培養箱的二氧化碳濃度不準。

對應解決方法給大家整理好，建議大家保存，以備不時(shí)之需。

實(shí)驗人員可能發(fā)生變化

細胞“飼養員”的更換

也可能影響細胞生長(cháng)速率

作為一名合格的細胞“飼養員”，一定要預先了解所養細胞的“習性”：用哪種培養法、使用何種類(lèi)型培養體系（血清種類(lèi)、基礎培養基類(lèi)型、是否添加生長(cháng)因子以及抗生素等），盡可能還原初始的培養環(huán)境，讓細胞有個(gè)適應的過(guò)程。另外，實(shí)驗者自身也要注意操作規范，按照標準流程培養。

實(shí)驗試劑可能發(fā)生改變

培養用的試劑

也可能會(huì )是影響因素

不同品牌的試劑可能會(huì )有些許差別，對于一些比較嬌貴的的細胞，這些細微的差別很可能會(huì )導致細胞生長(cháng)受到影響。因此我們一直強調大家“追本溯源”，盡可能用與原來(lái)一致的培養條件。

如果要更換試劑，建議大家先做個(gè)對照試驗，看看新的試劑對細胞生長(cháng)有沒(méi)有影響。

另外，除了以上這六點(diǎn)，還有一點(diǎn)需要特別注意，就是：

細胞的代次

一般來(lái)說(shuō)，細胞傳代次數是一定的（一些癌細胞系屬于特例），特別是像間充質(zhì)干細胞這類(lèi)對代次比較敏感的細胞，需要格外注意，傳代次數過(guò)高后（10-15代左右），細胞生長(cháng)速率也會(huì )明顯減慢。在實(shí)驗時(shí)，盡量選擇代次較低且狀態(tài)穩定的細胞。