支原體檢測方法有哪些？

支原體對細胞培養會(huì )帶來(lái)嚴重的危害，同時(shí)，它的發(fā)生率較高，肉眼不易察覺(jué)。有報道，在細胞培養室中，它的平均發(fā)生率甚至可高達63%。在生物制品中，它的發(fā)生率為1%~3%。

污染細胞的支原體主要有五個(gè)方面的可能來(lái)源：

1. 環(huán)境

2. 被污染的細胞

3. 人體表面的攜帶（如口腔、鼻腔、皮膚等）

4. 實(shí)驗試劑，如培養基、胰酶等

5. 未*消毒的實(shí)驗器具

傳統的支原體檢測方法有哪些呢？

方法一：培養法。直接將待測樣品涂布在支原體液體或固體培養基上，讓其生長(cháng)，一般需要數周，才能看到菌液變渾濁或有菌落長(cháng)出。 培養法是支原體檢測經(jīng)典的方法，其優(yōu)點(diǎn)是：靈敏度適中和結果可靠。但是培養法的一個(gè)主要缺點(diǎn)是時(shí)間周期太長(cháng)，不適合作為細胞污染的快速檢測方法。

方法二：DNA的熒光染色法。熒光染劑（如Hoechst 33258，DAPI）可以結合到細胞和支原體的DNA。被支原體污染的細胞經(jīng)染色后，如果在細胞核外與細胞周?chē)煽吹皆S多大小均一之熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA，則證明有支原體之污染。該法相對培養法快速，但是靈敏度較差。當用熒光染色法發(fā)現有支原體后，支原體的清除相對就較困難。

方法三：掃描電鏡法。將細胞樣品進(jìn)行掃描電鏡拍照，如果被支原體污染可以在細胞表面看到密密麻麻的小顆粒。該方法由于要使用電子顯微鏡，不適合用作實(shí)驗室常規檢測。

方法四：PCR法。PCR法相對較快，靈敏度也較高。是目前實(shí)驗室常用的支原體檢測方法。但是PCR法也有自己的致命缺點(diǎn)：細胞培養液上清常含有強烈抑制PCR擴增的代謝產(chǎn)物。因為很多研究人員直接使用細胞培養液上清原液進(jìn)行PCR檢測，如果檢測為陰性就認為沒(méi)有支原體污染。其實(shí)，還有一種可能性，就是PCR的擴增被細胞的代謝產(chǎn)物抑制了，而不是沒(méi)有支原體污染！

通常來(lái)說(shuō)，被污染的細胞應該丟棄，以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞，以往別的品牌的支原體清除劑，其實(shí)只是抑制劑，它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成，但無(wú)法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結合，破壞膜通透性，導致支原體膨脹破裂而死。