通常,如果懷疑細胞有支原體污染,可直接取細胞上清進(jìn)行支原體PCR檢測。因為存在支原體污染的細胞上清中,支原體密度為通常為10^6-10^8個(gè)/ml,已足以用于PCR檢測。
Minverva公司生產(chǎn)的支原體PCR試劑盒靈敏度高,特異性好,檢測的支原體種類(lèi)多,很受用戶(hù)的歡迎。
但有時(shí),支原體檢測前,還需對樣品中的支原體DNA進(jìn)行提取。那么,什么時(shí)候需要提取呢?
支原體提取與支原體檢測
當出現以下幾種情況時(shí),建議大家在進(jìn)行支原體qPCR前,先進(jìn)行提取支原體提取。
1、細胞培養液中存在抑制PCR的物質(zhì),這時(shí)就需要提取。細胞培養基中的血清濃度如果超過(guò)12%,那么對下游的PCR反應會(huì )產(chǎn)生抑制。酚紅,對熒光定量PCR的檢測也會(huì )干擾。這些均可以通過(guò)使用Miverva公司的支原體DNA提取試劑盒來(lái)克服。
2、對于樣品類(lèi)型是細胞團、疫苗、凍存細胞和石蠟包埋的組織,也需要提前提取DNA。
3、另外,如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml,則先需要用蛋白酶K進(jìn)行處理。
好物推薦
Minerva
Venor®GeM Sample Preparation Kit
貨號:56-1010
該試劑盒可從細胞上清和生物制品中分離支原體DNA,全程只需30分鐘。該試劑盒符合歐洲藥典規范。
分四步組成:
細胞溶解
DNA特異性與層析柱結合
祛除殘留的污染物和抑制劑
洗脫DNA。
需要注意的是,常規細菌和哺乳動(dòng)物細胞的DNA提取試劑盒是否能用于支原體DNA提取,值得懷疑。因為如果都提取出來(lái),則會(huì )對下游PCR檢測帶來(lái)干擾??傊?,提取后的DNA應具有一定的純度和產(chǎn)率。