血清有沉淀怎么辦？

細胞培養過(guò)程中的血清沉淀

在日常實(shí)驗過(guò)程中，一些同學(xué)或多或少都會(huì )遇到血清出現沉淀的情況。那么問(wèn)題來(lái)了：

血清中的沉淀是什么？

這些沉淀是如何產(chǎn)生的？

沉淀對細胞培養會(huì )造成影響嗎？

如何減少血清沉淀？

如果你也關(guān)心這些問(wèn)題，那就跟著(zhù)我們一起，來(lái)到今天的血清科普小課堂吧，幫你一篇理清血清沉淀的各種問(wèn)題！

細胞培養中

血清沉淀從何而來(lái)？

一般來(lái)說(shuō)，血清沉淀的成分可以簡(jiǎn)單分為以下幾種：

1、纖維蛋白：常見(jiàn)的體積比較大的沉淀物，達 1-2mm，肉眼可見(jiàn)。因為一些血清在收集和快速處理過(guò)程中，存在纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體），處于溶解狀態(tài)，但經(jīng)過(guò)濾分裝后，就會(huì )在瓶中凝結出現纖維蛋白的沉淀。

2、磷酸鈣：會(huì )使血清出現渾濁的一種沉淀物，并且在 37℃ 培養時(shí)出現增加。這類(lèi)沉淀物鏡下觀(guān)察是一個(gè)小黑點(diǎn)，由于布朗運動(dòng)，它們看上去仿佛可以運動(dòng)，因此常被誤認為是微生物污染。

3、膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)：也是血清中出現沉淀物的常見(jiàn)原因。

細胞培養中

血清沉淀有何影響？

血清沉淀會(huì )影響細胞生長(cháng)嗎？

一般情況下，沉淀物不會(huì )影響細胞培養，但如果細胞對于營(yíng)養物質(zhì)有特殊需求，沉淀物中的成分不能被細胞吸收，可能會(huì )引起細胞長(cháng)勢較差。

血清沉淀會(huì )影響細胞實(shí)驗嗎？

會(huì )影響血清過(guò)濾。一些特殊實(shí)驗中，需要對細胞培養基進(jìn)行過(guò)濾，如果血清中出現大量的沉淀物，混入培養基中，會(huì )導致過(guò)濾孔被堵塞，影響過(guò)濾效果。

血清沉淀導致細胞污染嗎？

一般情況下，正常的沉淀物不會(huì )導致細胞污染。

但多數情況下，血清沉淀會(huì )對我們判斷細胞是否出現污染造成困擾。

絮狀沉淀容易和真菌、細菌混淆；磷酸鈣沉淀引起的小黑點(diǎn)容易與支原體污染混淆。

細胞培養中

血清沉淀從何而來(lái)？

剛出廠(chǎng)的血清，應該是澄清透明的，為了保證品質(zhì)，血清會(huì )儲存在-20℃的環(huán)境中。如果運輸過(guò)程中，出現了溫度忽高忽低，反復凍融的情況，就容易析出大量沉淀。

另外，不正確的解凍方法也會(huì )引起血清產(chǎn)生大量沉淀。

細胞培養中

如何減少血清沉淀？

1、正確的運輸溫度：運輸過(guò)程中，要嚴格-20℃低溫，避免反復凍融。

2、使用正確的融化方法：在使用時(shí)，正確的解凍方法也很重要，這里推薦使用國際上通用的“三步法”解凍。

需要注意的是，如果血清是儲存在-80℃冰箱中，正式解凍前應先轉移至-20℃冰箱中過(guò)渡。

一次解凍后，分裝至無(wú)菌離心管中，盡量保證每管是一次的用量，分裝管解凍也遵循三步法，解凍后需全部用完。

3、使用正確的儲存方式：長(cháng)期儲存在 2-8℃或在室溫下放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，都會(huì )引起沉淀，建議配制好的*培養基在4℃冰箱中存放不要超過(guò)7天，血清分裝好后-20℃儲存。

4、特殊的處理：γ射線(xiàn)照射與熱滅活也容易引起沉淀析出，因此要注意射線(xiàn)照射劑量以及熱滅活方法（40℃水浴加熱20分鐘即可）。

細胞培養中

如何去除沉淀？

如果要除去血清中的沉淀，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管中，大約400g 離心，留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞，因此不建議用過(guò)濾的方法。

血清品質(zhì)

沉淀不是檢驗血清的硬指標，但為了實(shí)驗準確、實(shí)驗美觀(guān)、實(shí)驗便利，還是應該盡量減少沉淀的產(chǎn)生。掌握正確的血清解凍、使用方法，再加上一款品質(zhì)穩定的優(yōu)秀血清，對于細胞實(shí)驗來(lái)說(shuō)，至關(guān)重要。

正確的使用方法與優(yōu)質(zhì)的血清，二者缺一不可。

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