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在疫苗生產(chǎn)、生物制藥，細胞免疫，Car-T，以及基礎科研過(guò)程中的細胞培養試驗，支原體污染的預防和祛除，是保證生產(chǎn)質(zhì)量和實(shí)驗順利的重要環(huán)節。
往期文章，已經(jīng)為大家介紹了『支原體檢測』的常規方法，其中包括熒光定量PCR方法的檢測試劑盒，以及可做方法學(xué)驗證的標準品等。
本期文章，我們將進(jìn)一步、多角度的介紹『支原體祛除和預防』的常見(jiàn)簡(jiǎn)便方法，希望對疫苗生產(chǎn)、生物制藥、細胞學(xué)研究等項目的質(zhì)檢質(zhì)控有所幫助。
關(guān)于整個(gè)細胞培養過(guò)程中支原體祛除與預防，我們將從以下三個(gè)方面展開(kāi)：
一、工作區域中支原體祛除與預防
支原體可以說(shuō)是“無(wú)處不在"，稍有不慎，環(huán)境中那些對細胞有害的支原體，很容易污染培養體系。
因此，應將支原體的清除與預防，日常實(shí)驗室工作區域的清潔、維護過(guò)程中。
除了正確穿戴實(shí)驗防護用具外（如：口罩、細胞培養室專(zhuān)用實(shí)驗服、鞋套等），還應定期*清潔工作區域：用新捷爾滅等稀釋液進(jìn)行墻面、地面的噴灑和擦拭。對于桌面、實(shí)驗臺面以及擺放了儀器設備的地方，應選用針對性更強的支原體祛除預防試劑。
Minerva Biolabs Mycoplasma-off™就是一個(gè)不錯的選擇。該噴霧劑/濕巾中含有支原體專(zhuān)用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內迅速殺除支原體，而且對葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等微生物也有比較好的清除效果。
Mycoplasma-off™安全性高，沒(méi)有腐蝕性和致癌性成分，相比起其他消毒成分，將人體和實(shí)驗儀器設備的消毒風(fēng)險降至更低。
即用型消毒液，可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區的清潔干凈。
二、細胞培養體系中支原體祛除與預防
在進(jìn)行細胞培養實(shí)驗時(shí)，如果發(fā)現細胞生長(cháng)緩慢、甚至大量漂浮、細胞培養液提前變黃等情況，請務(wù)必警惕，有可能就是中了支原體的招。
對于珍貴的細胞株，我們往往希望可以拯救一下，首先可以用PCR/qPCR方法檢測細胞是否被支原體污染。
如細胞株已發(fā)生污染，采取以下三種方法處理，能在盡可能短的時(shí)間，高效祛除支原體，并有一定的預防能力：
1、Zell Shield®支原體祛除劑（培養基用）
適用范圍
細胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續培養（如已轉染或大量擴增的細胞）。
初始培養的原代細胞。
存在支原體污染高風(fēng)險的細胞。
用法
1:100加入培養基。
當細胞存在支原體污染時(shí)，應先對細胞懸浮沖洗三次，再用含Zell Shield®培養基培養。每次傳代前都應做懸浮沖洗處理。連續傳代4次，支原體即可祛除。
2、Mynox® Gold支原體祛除劑（珍貴細胞保種用）
適用范圍
被支原體污染的珍貴細胞或不易獲得的生物樣本（如細胞種子）。
用法
將「首CI治療液」加入到4.5ml培養基（FBS需≤5%）中，培養細胞（細胞數為104~105）。
細胞長(cháng)至80%-90%匯合時(shí)，細胞傳代。將1管「鞏固防護液」加到9.5ml培養基中，用該培養基繼續培養。
重復步驟2，細胞再傳代2次，支原體即*祛除。
注意：每次傳代時(shí)，最好都能把細胞懸浮沖洗三次，可取得更好的治療效果。
3、Mynox®支原體祛除劑（珍貴樣本用）
適用范圍
被支原體污染的珍貴細胞、不易獲得的生物樣本或病毒收獲液（特別是不能長(cháng)期培養的樣品）。
用法
對于貼壁細胞：
培養皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培養基中（FBS≤5%），混勻。
再加入2ml細胞（細胞數為10^4~10^5，培養基中的FBS需≤5%）。
細胞培養2小時(shí)，棄上清，換用新鮮培養基培養4代即可。
對于懸浮細胞：
在離心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶（0.125 %，5 mM EDTA in PBS），混勻。
加入1.6ml細胞（細胞數為10^4~10^5）。
室溫靜置30min。
低速離心5min。棄上清，換用新鮮培養基培養4代即可。
三、水浴鍋、水箱等支原體祛除與預防
水浴鍋、細胞培養箱中的水槽，也容易變?yōu)楦黝?lèi)污染滋生的溫床。保持水槽的潔凈，對細胞培養的順利進(jìn)行非常重要。因此在進(jìn)行清潔時(shí)，不要忘記水浴鍋、水槽等地方。
這里推薦大家使用支原體祛除劑（水槽用）——Water Shield™。
Water Shield™可持續作用4周，使水源避免受到支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。且不含醛類(lèi)或疊氮化物，對細胞無(wú)毒害。
使用起來(lái)也十分便捷，Water Shield™與無(wú)菌水按1:200比例，直接加入水中，使用方便，使用后不產(chǎn)生水垢
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