細胞實(shí)驗中的小細節
細胞實(shí)驗是眾多科研項目的基礎,而細胞培養作為細胞實(shí)驗最基礎的技術(shù)之一,更是滲透到了生物學(xué)研究的方方面面。
打好根基,上層建筑才能穩固。細胞培養中血清使用方法的一些小細節,往往能夠影響實(shí)驗結果的好壞,甚至是成敗。
今天我們匯總了一些錯誤案例,拿給給大家敲敲警鐘,這些錯誤,可千萬(wàn)別再犯!
Vol.1/ 血清直接4℃解凍
4℃過(guò)夜解凍 ×××
三步法解凍 √√√
如何解凍血清,也是個(gè)老生常談的話(huà)題了。很多小伙伴還是習慣將血清從-20℃冰箱中拿出來(lái)后,直接丟進(jìn)4℃冰箱過(guò)夜,甚至是直接放在操作間,室溫環(huán)境下解凍,第二天一早直接開(kāi)始實(shí)驗。
這樣做都會(huì )導致血清出現融化不均勻的情況,使血清產(chǎn)生大量沉淀,影響血清品質(zhì)。
一旦產(chǎn)生大量沉淀,不少小伙伴就會(huì )離心或者過(guò)濾取出絮狀物,讓本來(lái)營(yíng)養豐富的血清,變得“寡淡",細胞缺少相關(guān)蛋白、因子,自然更容易“營(yíng)養不良",細胞狀態(tài)不好,實(shí)驗結果也可想而知。
因此,強烈推薦大家使用三步法溶解。
這樣解凍的血清質(zhì)地澄清且均勻,不易產(chǎn)生大量沉淀。保證血清品質(zhì),讓細胞營(yíng)養充分,做起實(shí)驗來(lái)更得心應手。
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Vol.2/ 一勞永逸法配血清
配超多培養基慢慢用×××
現用現配 √√√
為了省事,會(huì )解凍一大桶血清,然后配制成*培養基,放在冰箱里慢慢用。這其實(shí)是非常不好的習慣。
*培養基中的成分,例如:L-谷氨酰胺、抗生素,在室溫甚至是4℃冰箱中,都是比較容易分解的,血清也容易產(chǎn)生沉淀。
因此,如果配制好的培養基,長(cháng)期儲存在4℃冰箱中,極易變質(zhì)、失活,對于細胞來(lái)說(shuō),“補品"秒變“藥",所以我們建議,*培養基在4℃冰箱中存放不要超過(guò)7天。
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Vol.3/ 血清一定要熱滅活
血清一定要熱滅活 ×××
根據情況決定 √√√
對于正規的胎牛血清而言,是不需要熱滅活的。
熱滅活的目的是消除補體對實(shí)驗的影響,正規胎牛血清采血時(shí)間是5-8月齡的胎牛,此時(shí)牛胚胎還未形成完整的補體系統,因此熱滅活就顯得多此一舉了。
不僅如此,熱滅活后的血清,更容易產(chǎn)生沉淀,影響血清品質(zhì),導致細胞生長(cháng)緩慢。沉淀物還容易擾亂視野,造成細胞被污染了的假象。實(shí)驗者“敵我不分",細胞背起了“污染"的“大鍋"。
所以,如果不是從事免疫學(xué)、ES細胞、昆蟲(chóng)細胞、平滑肌細胞相關(guān)研究時(shí),且使用的血清非胎牛血清,大可不必進(jìn)行熱滅活!