科研中，如何快速檢測SARS-CoV-2？

一、產(chǎn)品用途：

新guan病毒RT-qPCR引物/探針（套裝）（英文名：SARS-CoV-2 Confirm），用于定性檢測和分析新guan病毒RNA。它僅用于研究，不用于臨床診斷。

凍干粉復溶后在-18℃以下保存二、產(chǎn)品描述：

1. 該產(chǎn)品包括三個(gè)小管：

①橙蓋： 2019- nCoV Mix（凍干粉），1管。

此管為新guan病毒引物/探針，可特異性擴增新guan病毒的 RdRp基因（即RNA依賴(lài)性RNA聚合酶基因），而其他冠 狀病毒RNA不會(huì )被檢測到 【1】【2】 。（該引物/探針 依據WHO診斷參考實(shí)驗室公布的新guan病毒引物/探針序 列而設計 【1】 。更多詳情可訪(fǎng)問(wèn)：

如要檢測其他冠狀病毒，推薦MB公司提供的其他冠狀病毒引物/探針，品名：CoV Screen (without ConviFlex™RT-Taq Mix)，貨號：271-1100。

②綠蓋 ： Positive Control RNA（陽(yáng)性對照RNA，凍干 粉），1管。

此陽(yáng)性對照RNA為一段合成的RNA序列（序列來(lái)自武漢 的病毒株）。

③白蓋：PCR Grade Water（液體），1管。

2.使用前，①橙蓋和②綠蓋先用PCR級水（③白蓋）復溶，并分裝，避免反復凍融。

3.該引物/探針應與MB公司提供的【RNA病毒檢測試劑盒】（英文名：ConviFlex™RT-Taq Mix, 貨號192-0025/guan0100/-0250）一起使用，用于新guan病毒RT-qPCR反應檢測。

4．檢測樣本需為抽提過(guò)的RNA樣本。

5.新guan病毒的靶基因RdRp是用FAM™通道檢測，擴增的人RNA酶P基因（過(guò)程對照）用ROX™通道檢測，用以評估樣本的制備質(zhì)量。

三、產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 靶點(diǎn)特別。依據WHO國際標準，此引物探針為新guan病毒RdRp基因，而非市面上常見(jiàn)的ORF1ab和N基因或E基因。

2.陽(yáng)性對照RNA為一段合成的RNA序列。

3. 主要組分為凍干粉，4℃保存，儲存運輸方便，性能穩定。

4. 適用于科研中，各種來(lái)源的RNA樣本，包括拭子、活檢組織、哺乳動(dòng)物細胞和細菌等。

四、需用戶(hù)自己準備的試劑耗材和儀器：

1. RNA病毒檢測試劑盒（RT-qPCR法）（英文名：ConviFlex™ RT-Taq Mix，貨號192-0025/-0100/-0250）

2. 熒光定量PCR儀（qPCR儀）

3. 無(wú)DNase和RNase的qPCR反應管

4. 離心機

5. 移液器及帶濾芯吸頭（不含DNase和RNase）

6. 用戶(hù)自己提取的RNA或現成的RNA樣品。（抽提過(guò)程建議使用商品化的RNA提取試劑盒完成，如MB廠(chǎng)家的：【病毒RNA提取試劑盒】（ExtractNow™ Virus RNA Kit，貨號611-1010/-1050/-1250）或【病毒RNA拭子提取試劑盒】（ExtractNow™ Virus RNA Swab Kit，貨號611-2250）。

五、操作注意事項：

1. 該引物/探針應僅由經(jīng)過(guò)培訓的實(shí)驗室人員使用。

2. 始終穿上合適的防護服和戴一次性手套。

3. 根據樣品類(lèi)型，應謹慎處理所有樣品。

4. 請遵循WHO推薦的方法處理樣本。

5. 該試劑盒不含有害物質(zhì)。殘余物可以根據當地法規丟棄。

六、操作步驟：

步驟1. 試劑制備： 包括試劑 溶解 等預處理步驟

步驟2. RT-qPCR引物/探針mix制備

步驟3. 設置qPCR程序

步驟4. 啟動(dòng)程序

步驟5. 數據解讀

七、使用注意事項：

1. 使用前應認真閱讀說(shuō)明書(shū)。

2. 來(lái)自不同批次的試劑不能混合。

3. 試劑盒內的試劑應始終作為一個(gè)整體溶解分裝。

4. 試劑盒應在效期內使用。

5. 每次PCR至少應設置一個(gè)陽(yáng)性對照。每次PCR至少應設置一個(gè)陰性對照和/或一個(gè)無(wú)模板對照。

6. 建議在無(wú)RNA和DNA污染的條件下進(jìn)行RT-PCR，以避免操作過(guò)程中DNA或非特異RNA的交叉污染。（MB公司推薦使用PCR污染祛除噴霧，英文名：PCR Clean™，貨號15-2025，預先清潔實(shí)驗環(huán)境。）

7. 盡量減少RNA樣品的凍融次數，同時(shí)避免RNA酶污染，以減少RNA降解的風(fēng)險。（RNA降解會(huì )極大地限制了RT-qPCR反應的性能）。請確保高質(zhì)量的完整RNA用于檢測。

8. 樣本制備過(guò)程中，注意避免其他DNA的污染，DNA的干擾也會(huì )降低qPCR的準確性。