支原體祛除
在某些細胞實(shí)驗過(guò)程中,所培養的細胞十分珍貴:要么是大面積擴增的細胞,一旦丟掉將前功盡棄從0開(kāi)始;要么是細胞株本身就很稀有,不能丟棄。在這些情況下,一旦細胞發(fā)生支原體污染,很容易讓沒(méi)有經(jīng)驗的小伙伴門(mén)焦頭爛額、無(wú)從下手。市面上琳瑯滿(mǎn)目的支原體祛除試劑,到底該怎樣選擇?
今天我們就“如何選擇細胞支原體祛除試劑"這一問(wèn)題,給出相應的建議,希望對大家有所幫助!
一、品牌選擇
盡量選擇有較多成功案例、在市場(chǎng)上有一定zhi名度、客戶(hù)群體廣泛,且售后有保障的的品牌。
德國Minerva Biolabs,簡(jiǎn)稱(chēng)MB,就是這樣一個(gè)備受信賴(lài)的品牌。
該公司成立于1999年,專(zhuān)注于支原體檢測與祛除,其產(chǎn)品有效診斷和消除細胞培養物和生物制藥中的支原體污染,廣受?chē)鴥韧饪蒲杏脩?hù)贊譽(yù)。
二、產(chǎn)品選擇
德國MB有3種支原體祛除劑,均可用于細胞中支原體的祛除,但在使用方法和使用效果上略有不同。
Zell Shield®
復合抗生素成分,抑制支原體蛋白和DNA合成,也抑制細菌和真菌。
適合細胞已發(fā)生支原體污染,但又不愿丟棄,希望繼續培養:如已轉染或大量擴增的細胞的情況。
使用時(shí)需要采用懸浮沖洗法,并連續培養三代,關(guān)于懸浮沖洗法,往期文章中也有詳細介紹:
如何祛除「普通細胞」的支原體污染?
消化細胞
?
離心
?
棄上清
?
PBS清洗細胞
?
低速離心棄上清
重復清洗3次
?
加入含有Zell Shield®的
新鮮培養基
Mynox®
對于無(wú)法長(cháng)期培養的珍貴樣本或病毒收貨液,則推薦使用德國MB公司的Mynox® ,處理3小時(shí),直接殺除。關(guān)于Mynox®的產(chǎn)品特點(diǎn)往期文章也有介紹:
「珍貴細胞」遭遇支原體污染,揭秘拯救全過(guò)程
使用方法:
(1)細胞重新傳代時(shí),用含Mynox®、5%FBS的的培養基替換原有培養基,對細胞進(jìn)行培養
(2)孵育培養2-3小時(shí)
(3)對細胞進(jìn)行換液
(4)用不含Mynox®的正常培養基(原始培養條件)對細胞進(jìn)行培養,傳代3-4次
(5)對細胞進(jìn)行支原體檢測
Mynox® Gold
若是可以培養超過(guò)一個(gè)月的細胞,則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold,直接殺除+鞏固防護兩步處理,祛除支原體的同時(shí),可進(jìn)一步在后續培養中鞏固清除效果,防止支原體“卷土重來(lái)"。Mynox®Gold的產(chǎn)品特點(diǎn)往期文章也有介紹:
「珍貴細胞」遭遇支原體污染,揭秘拯救全過(guò)程
使用方法:
(1)治療液與含5%FBS的培養及混合
(2)將混合后的治療液添加至培養皿中
(3)將接種細胞
(4)培養細胞至80%-90%匯合后,進(jìn)行傳代
(5)傳代的同時(shí)加入鞏固液
重復(4)(5)兩次
(6)再無(wú)Mynox® Gold的情況下傳代
(7)用Venor® Gem支原體檢測試劑盒檢測