支原體PCR絕對定量標準品的說(shuō)明及復溶操作

　　支原體PCR絕對定量標準品對支原體PCR或qPCR方法進(jìn)行驗證，除了可參考試劑盒生產(chǎn)廠(chǎng)家自身的驗證外（盡管它不能*替代用戶(hù)自己的驗證，但可提供特異性驗證的一些信息，如使用哺乳動(dòng)物細胞DNA、某些細菌菌屬DNA等，而不必使用者自己再去嘗試），用戶(hù)自己主要是對方法的檢測限和耐用性進(jìn)行驗證，這里常用的就是10CFU支原體標準品。100CFU標準品可作為一個(gè)補充。

　　支原體PCR絕對定量標準品的說(shuō)明：

　　1.定量標準品dna包括支原體基因組dna和細菌基因組dna，用于梯度稀釋后，qpcr標準曲線(xiàn)的繪制。

　　2.支原體基因組dna用于支原體核酸擴增檢測的方法學(xué)驗證，包括確定支原體qpcr方法的檢測限。

　　3.細菌定量標準品dna用于qpcr檢測水中細菌的精確定量。

　　復溶操作：

　　1.標準品短時(shí)離心，以收集凍干粉至管底。

　　2.取試劑盒提供的tris緩沖液（白蓋）100µl，加入到標準品管內（綠蓋）。

　　3.室溫下靜置5分鐘。

　　4.渦旋混合10秒鐘，離心5秒鐘。

　　5.選合適體積的復溶dna用于pcr擴增或梯度稀釋?zhuān)灾苽錁藴是€(xiàn)。

　　支原體PCR絕對定量標準品每批支原體都會(huì )提供CFU與基因拷貝數的比值，以方便二者的換算。因為10CFU只能確定PCR能夠達到的檢測限在10CFU以下，但無(wú)法具體確定靈敏度的數值。帶DNA拷貝數標定的基因組DNA標準品則可進(jìn)一步確定檢測限的數值。而且核酸法最終檢測的對象是核酸，而產(chǎn)品的QC主要關(guān)注的是支原體，核酸的存在是側面反映支原體存在的一個(gè)指標。CFU與基因拷貝數的比值很好地對二者進(jìn)行了關(guān)聯(lián)。