提到配制細胞培養基,你能想到啥?
營(yíng)養成分和緩沖體系多數情況下都是必要的,但這抗生素,真的是必要的嗎?有了抗生素,細胞就無(wú)懼污染了嗎?
關(guān)于抗生素在細胞培養過(guò)程中的意義,一直都有很矛盾,不用細胞容易污染,一直用對細胞狀態(tài)也會(huì )有影響,到底該怎么辦?今天我們就來(lái)一探究竟。
抗生素對細胞的影響
很多同學(xué)養細胞的手藝,都是從師兄師姐那里「傳承」來(lái)的,由于沒(méi)有辦法做到絕對的無(wú)菌,所以從經(jīng)驗角度出發(fā),前輩們都會(huì )告訴剛開(kāi)始養細胞的同學(xué),可以在配制培養基的時(shí)候,加入1%左右的雙抗,防止細胞出現細菌污染(有些時(shí)候甚至出現離開(kāi)抗生素,細胞沒(méi)過(guò)幾天立馬就被污染的情況)。
這就造成一些小伙伴在培養基中「預防性添加抗生素」,其實(shí)圖的就是個(gè)心安,抱著(zhù)「有了抗生素就不怕污染」的心態(tài)。但事實(shí)上,抗生素并不能一勞永逸,真菌、支原體這些污染是它不能夠對抗的,甚至濫用還會(huì )適得其反。
這抗生素對細胞有什么影響呢?
早在十幾年前,就有很多報導指出β-內酰胺類(lèi)抗生素及氨基糖甙類(lèi)抗生素,對真核細胞培養有抑制增殖作用[1]。并且這種抑制增殖作用在原代細胞和干細胞等難養細胞上尤其明顯[2-3]。2017年,加州大學(xué)Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發(fā)表文章,呼吁在細胞培養過(guò)程中減少抗生素的使用[4]。他們發(fā)現抗生素(雙抗:青霉素和鏈霉素)的使用影響人體肝細胞中基因表達與基因調控。其中有209個(gè)基因的表達發(fā)生了改變,特別是與藥物和應激反應相關(guān)的基因。超過(guò)9,500個(gè)基因調控元件發(fā)生了變化,并且很多調節元件位于參與細胞分化,核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數量在龐大的細胞基因庫中不值一提,但這絕對不是一個(gè)應該被忽略的事件。
雖然抗生素對真核細胞生長(cháng)的影響機制至今尚未明確,但是為了細胞更好的生長(cháng),實(shí)驗結果更加準確,實(shí)驗數據更加穩定,在實(shí)驗過(guò)程中盡量不要隨意使用。
參考文獻:
[1] KA Neftel, Hubscher, U. Effects of beta-lactam antibiotics on proliferating eucaryotic cells.[J]. Antimicrobial Agents & Chemotherapy, 1987, 31(11):1657-61.
[2] Varghese D S , Parween S , Ardah M T , et al. Effects of Aminoglycoside Antibiotics on Human Embryonic Stem Cell Viability during Differentiation In Vitro[J]. Stem Cells Int, 2017, 2017:1-18.
[3] Nygaard U H , Niehues H , Rikken G , et al. Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models[J]. Experimental Dermatology, 2016, 24(12):964-965.
[4] Ryu A H , Eckalbar W L , Kreimer A , et al. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene expression and regulation[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):7533.
如何有效避免污染?
抗生素對細胞有一定傷害,但是不加抗生素又要怎樣避免實(shí)驗出現污染的狀況呢?
1、實(shí)驗環(huán)境(包括培養箱內部、冰箱、超凈臺)要進(jìn)行定期的消毒,用消毒液(75%乙醇溶液、新潔爾滅等)擦拭地面墻面桌面等地方,不留衛生死角;紫外線(xiàn)照射30分鐘以上。
2、定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺臺、桌面等地方。
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3、培養箱、水浴鍋的水槽要定期清潔,用支原體預防試劑處理。
4、細胞房實(shí)驗要用專(zhuān)用的實(shí)驗服:進(jìn)入細胞房正式實(shí)驗前須換上專(zhuān)用防護服、專(zhuān)用鞋或鞋套。
5、實(shí)驗廢料不在細胞房堆積,及時(shí)清理。
6、遵照細胞實(shí)驗操作方法,實(shí)驗過(guò)程中嚴格無(wú)菌操作。
另外,選擇一款合格的實(shí)驗試劑也很重要。就拿血清來(lái)說(shuō),合格的血清產(chǎn)品,一定要有明確的檢測報告,指出微生物檢測情況。
以Ausbian血清為例:各項指標均符合要求。
Ausbian血清的優(yōu)勢
1. 精選內毒素更低批次(≤3EU/ml)。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩定供應品牌。
2. 新批次在試用前,提供試用服務(wù),養細胞更放心。
3. 每個(gè)批次產(chǎn)量800-2000升,試用滿(mǎn)意的實(shí)驗室批號優(yōu)先鎖定,保證大多數項目?jì)赡瓴恍钃Q批次,細胞試驗數據穩定。
4. 每年按廠(chǎng)家生產(chǎn)順序,會(huì )有多批次平行供應,每個(gè)實(shí)驗室專(zhuān)屬批號管理,保證供貨穩定。
所有血清出廠(chǎng)前,均經(jīng)過(guò)嚴格質(zhì)控,每個(gè)批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無(wú)菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長(cháng)能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。
5. 為Ausbian血清用戶(hù)免費提供申報支持,具有完整的檢測報告,為各類(lèi)項目的申報提供支持(同時(shí)為血清VIP用戶(hù)在支原體檢測、方法學(xué)驗證等方面,提供更多免費延伸性技術(shù)幫助)。
6. 針對特殊科研項目,可提供3-5個(gè)平行批次,讓試驗人有更多選擇空間。
7. 為Ausbian血清提供免費代儲存服務(wù),為儲存空間不足的實(shí)驗室提供可靠的血清倉儲保護,按要求隨時(shí)發(fā)貨。
8. Ausbian血清從出廠(chǎng),到實(shí)驗室,全程低溫冷鏈保護,確保血清無(wú)反復凍融。
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11. 免費專(zhuān)業(yè)幫助,匯集近二十年,千萬(wàn)個(gè)血清用戶(hù)細胞培養經(jīng)驗,為各種細胞培養提供問(wèn)題梳理分析,解決方案參考。