支原體檢測方法
理論上,檢測細胞或相關(guān)培養產(chǎn)品中,是否含有支原體的方法有很多,染色法、培養法、核酸法、ELISA法等,各有其優(yōu)缺點(diǎn)。
干細胞治療項目、免疫細胞治療項目、CAR-T項目、抗體藥生產(chǎn)、疫苗生產(chǎn),另外還有一些重要的細胞培養,例如細胞典藏項目登,都需要對培養的細胞或收獲的產(chǎn)物,完成準確的支原體檢測,以確保產(chǎn)物沒(méi)有支原體污染。
一般來(lái)說(shuō),需要檢測方法應具備以下特點(diǎn):
(1)?結果準確
(2)最好還操作簡(jiǎn)便,出結果快
(3)需要時(shí),還需有方法驗證,符合國際或國內《藥典》的要求。
因此,綜合考慮,核酸法支原體檢測,成為更多實(shí)驗人員的選擇。
核酸法檢測支原體,推薦使用商品化的檢測試劑盒,經(jīng)過(guò)市場(chǎng)考驗,結果更穩定。
支原體核酸法
檢測試劑盒
以德國MB支原體檢測相關(guān)產(chǎn)品為例,簡(jiǎn)述常見(jiàn)的幾種檢測用試劑盒。
選購時(shí),需要從自身實(shí)驗需求出發(fā),選擇能夠實(shí)現自己實(shí)驗目標的產(chǎn)品??偟膩?lái)說(shuō),qPCR法更適合定量實(shí)驗;常規PCR法更適合只需定性的實(shí)驗。
一、qPCR經(jīng)典法試劑盒:
Venor® Gem qEP
①經(jīng)典法qPCR試劑盒,遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀(guān)察。
③高靈敏度,MB公司的經(jīng)典法試劑盒檢測限可達到≤10CFU/ml。
④該試劑盒可與絕大多數、能夠檢測熒光染料 FAM 和 HEX的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀結合使用。
二、常規PCR經(jīng)典法試劑盒
Venor® Gem Classic
①內控對照為獨立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。
②高特異性,僅一條陽(yáng)性對照條帶,即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀(guān)察。
③高靈敏度。
④歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體,與細胞和真核DNA無(wú)交叉反應。
三、常規PCR預分裝法試劑盒
Venor® GeM Advance
①內控對照已加在預混液中,無(wú)需另外配置,使用便捷。
②高特異性,僅一條陽(yáng)性對照條帶,即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀(guān)察。
③高靈敏度。
④歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。
⑤各類(lèi)試劑預先包被分裝在PCR管中,無(wú)需將預混液再進(jìn)行分裝,節約時(shí)間,減少污染。
⑥凝膠上樣緩沖液和染料已預混在反應緩沖液中。PCR反應結束后,產(chǎn)物可直接上樣到瓊脂糖凝膠上。簡(jiǎn)化操作步驟,節約時(shí)間。
四、常規PCR一步法試劑盒
Venor® GeM OneStep
①內控對照已加在預混液中,無(wú)需另外配置,使用便捷。
②高特異性,僅一條陽(yáng)性對照條帶,即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。
操作簡(jiǎn)單,易于觀(guān)察。
③高靈敏度,1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
④歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體。