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在進(jìn)行細胞實(shí)驗的過(guò)程中，相信大家都有這樣的經(jīng)歷：實(shí)驗規劃恨不得精細到每小時(shí)，甚至連哪天出數據都預估好了。
But......
理想很豐滿(mǎn)，現實(shí)往往很骨感！
“隔壁王師兄的細胞都能傳代了，我的這細胞，咋長(cháng)得這么慢呢？"
所以今天，我們就來(lái)聊聊，細胞生長(cháng)緩慢（異常情況的慢，一些特殊細胞不在討論范圍內）的可能原因。
原因很復雜，可以總結為以下幾點(diǎn)，如果小伙伴們有更多觀(guān)點(diǎn)，歡迎補充
細胞可能存在污染
各類(lèi)細胞污染
都有可能導致細胞生長(cháng)緩慢
如果培養體系，不小心被細菌、真菌、支原體污染，都會(huì )導致細胞因缺乏營(yíng)養而出現生長(cháng)緩慢的現象。
細菌污染發(fā)展迅速，一般會(huì )出現培養基渾濁、變黃的現象；真菌污染**辨認，顯微鏡下可見(jiàn)絲狀菌體（有些甚至嚴重到肉眼可見(jiàn)）；而支原體污染往往防不勝防，顯微鏡下也很難捕捉到它的身影。支原體污染的典型特征是培養基提前變黃、細胞生長(cháng)受阻，后期細胞大量死亡等。
因此，如果細胞生長(cháng)緩慢，首先要考慮細胞是否存在污染。并做相應的處理。具體處理方法見(jiàn)以下幾篇文章：
細胞培養中的污染監控與檢測——細菌
細胞培養中的污染監控與檢測——真菌
細胞培養中的污染監控與檢測——支原體
培養體系有瑕疵
沒(méi)有根據細胞特性調整培養體系
細胞的體外培養，依賴(lài)于完quan培養基的支持與保護。有些小伙伴拿到一株陌生的細胞，沒(méi)有將培養體系研究清楚就開(kāi)始實(shí)驗，由于培養環(huán)境的改變，導致細胞一時(shí)無(wú)法適應，而出現生長(cháng)受阻甚至停滯的狀態(tài)。
當我們排除了細胞污染的情況后，就要考慮培養體系是否合理了：培養基種類(lèi)、品牌是否進(jìn)行過(guò)更換？血清類(lèi)型是否用錯等等，盡可能保證與原培養條件一致，如果要更換，也要循序漸進(jìn)。
細胞初始狀態(tài)較差
細胞長(cháng)得慢
很可能不是你的鍋
可能最一開(kāi)始復蘇的細胞，就被污染/活力不足。因此，建議大家再復蘇一管同種細胞（**不是同批次凍存的），與現有細胞進(jìn)行比較，觀(guān)察長(cháng)勢。
公共設備可能存在問(wèn)題
儀器的參數
也會(huì )影響細胞狀態(tài)
如果細胞不存在污染，培養體系沒(méi)有瑕疵、細胞初始狀態(tài)也沒(méi)有問(wèn)題，那么可以考慮公共儀器設備是否存在紕漏。
最常見(jiàn)有水浴鍋溫度、室內溫度及濕度、培養箱參數、水浴鍋溫度等。
水浴鍋是細胞培養室常用的儀器，要定期用溫度計對其工作溫度進(jìn)行檢查，觀(guān)察是否存在溫度不準、溫度驟變的情況。另外要強調一點(diǎn)，水浴鍋也是常見(jiàn)的污染源之一，水浴鍋中的水**使用無(wú)菌水，并定期做好清潔工作，推薦大家使用MB WaterShield，可以有效清除、預防水槽中的支原體，方便安全、省時(shí)省力省心。
細胞實(shí)驗室的溫度及濕度：儀器還是操作對溫度沒(méi)有特殊要求，維持舒適的溫度即可，比如18~26℃；過(guò)高的濕度會(huì )導致微生物的滋生，所以建議正常維持濕度在70%以下。應定期用溫度濕度測試儀對細胞實(shí)驗室進(jìn)行檢測，以防溫控系統出現故障。
培養箱參數：一般哺乳類(lèi)與禽類(lèi)細胞在體外培養的適宜溫度是37～38℃；大多數細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開(kāi)放式培養中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。但在實(shí)際操作過(guò)程中，細胞培養箱有可能會(huì )出現以下故障，影響細胞培養體系，進(jìn)而使細胞生長(cháng)變得緩慢：
溫度和溫度設定不準；
細胞培養箱濕度不能維持；
細胞培養箱的二氧化碳濃度不準。
對應解決方法給大家整理好，建議大家保存，以備不時(shí)之需。
實(shí)驗人員可能發(fā)生變化
細胞“飼養員"的更換
也可能影響細胞生長(cháng)速率
作為一名合格的細胞“飼養員"，一定要預先了解所養細胞的“習性"：用哪種培養法、使用何種類(lèi)型培養體系（血清種類(lèi)、基礎培養基類(lèi)型、是否添加生長(cháng)因子以及抗生素等），盡可能還原初始的培養環(huán)境，讓細胞有個(gè)適應的過(guò)程。另外，實(shí)驗者自身也要注意操作規范，按照標準流程培養。
實(shí)驗試劑可能發(fā)生改變
培養用的試劑
也可能會(huì )是影響因素
不同品牌的試劑可能會(huì )有些許差別，對于一些比較嬌貴的的細胞，這些細微的差別很可能會(huì )導致細胞生長(cháng)受到影響。因此我們一直強調大家“追本溯源"，盡可能用與原來(lái)一致的培養條件。
如果要更換試劑，建議大家先做個(gè)對照試驗，看看新的試劑對細胞生長(cháng)有沒(méi)有影響。
另外，除了以上這六點(diǎn)，還有一點(diǎn)需要特別注意，就是：
細胞的代次
一般來(lái)說(shuō)，細胞傳代次數是一定的（一些癌細胞系屬于特例），特別是像間充質(zhì)干細胞這類(lèi)對代次比較敏感的細胞，需要格外注意，傳代次數過(guò)高后（10-15代左右），細胞生長(cháng)速率也會(huì )明顯減慢。在實(shí)驗時(shí)，盡量選擇代次較低且狀態(tài)穩定的細胞。
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