支原體qPCR檢測的儀器設置和注意事項

目前在市場(chǎng)上，有一款支原體qPCR檢測試劑盒(英文品名：Venor®Gem qEP，廠(chǎng)家：德國MB) 廣受藥廠(chǎng)的歡迎。

該試劑盒經(jīng)過(guò)全面的方法學(xué)驗證，符合歐洲藥典和日本藥典要求，適合細胞治療、CAR-T、抗體藥、疫苗等藥廠(chǎng)的過(guò)程控制、放行檢測以及臨床申報。要用好該試劑盒，除了嚴格遵循說(shuō)明書(shū)的操作外，還有些注意事項，下面小編向您介紹一下。

一、儀器的設置

要注意你所用的qPCR儀有幾個(gè)通道，是否可檢測相應的熒光素。

MB的支原體qPCR檢測試劑盒（英文名：Venor®Gem qEP）適用的熒光定量PCR儀的機型廣泛，相關(guān)設置可從締一生物網(wǎng)站下載。

二、基線(xiàn)設置

許多qPCR儀軟件有自動(dòng)基線(xiàn)設置功能。

但要注意，有時(shí)也需要查看原始熒光數據，了解各個(gè)樣本的基線(xiàn)水平。

如下圖圖1，有一些樣本的基線(xiàn)水平較高，就提示這些樣本可能存在一定的數據偏差或操作錯誤。

圖1. 基線(xiàn)校正前的曲線(xiàn)

三、閾值設置

許多qPCR儀軟件有自動(dòng)閾值設置功能。但也應關(guān)注一下，儀器自動(dòng)設定的閾值線(xiàn)是否合適。這需要一定的經(jīng)驗。

如果閾值設定太低，會(huì )使靈敏度**化，增加假陽(yáng)性的可能；

如果閾值設定太高，可能會(huì )影響靈敏度并導致假陰性。

圖2和圖3就是一個(gè)例子。

圖2. ABI 7500自動(dòng)閾值的設定。

圖3. ABI 7500手動(dòng)閾值的設定（熒光**值的5%）

在圖2中，有2個(gè)樣本為支原體陽(yáng)性（黃線(xiàn)和紅線(xiàn)）。

在圖3中，這2個(gè)樣本中有一個(gè)變?yōu)殛幮粤耍t線(xiàn)）。

總之，閾值設定，如果是軟件自動(dòng)設置，應再看一下閾值線(xiàn)的位置是否合適。必要時(shí)可進(jìn)行手動(dòng)設置。