淺談『臨床項目申報』中的支原體檢測

臨床項目申報與支原體檢測

細胞體外培養過(guò)程中，很容易受到支原體污染的困擾。

在生物制品和細胞治療領(lǐng)域，支原體檢查是保證產(chǎn)品和治療安全的重要一環(huán)。生物源性原材料、采用細胞培養技術(shù)制備的疫苗、抗體，以及細胞或基因治療產(chǎn)品在生產(chǎn)過(guò)程的不同階段都要進(jìn)行支原體污染的檢查。

歐洲藥典規定對細胞治療產(chǎn)品需要進(jìn)行嚴格的支原體檢測；美國FDA規定為了提高細胞生物制品安全性，需要進(jìn)行支原體污染檢測；我國藥典規定主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治療用細胞應進(jìn)行支原體檢測。

但在項目申報前，需要進(jìn)行支原體檢測。

傳統支原體檢查方法是培養法和指示細胞培養法，并為藥典所認可和收錄。但由于這兩種方法耗時(shí)又耗力，因此，近年來(lái)，『支原體qPCR檢測』在工業(yè)領(lǐng)域的應用越來(lái)越多。

但在項目申報前，先需要進(jìn)行方法學(xué)驗證，依據藥典，在檢測限、特異性和耐用性方面達到要求后，才能替代傳統的檢查方法。

適合臨床項目申報的支原體檢測和方法驗證，德國Minerva Biolabs（簡(jiǎn)稱(chēng)德國MB）公司已有成熟的產(chǎn)品及商業(yè)化應用。

不僅提供有符合國際藥典的『支原體qPCR檢測』試劑盒，更有一系列支原體標準品及輔助產(chǎn)品，用于qPCR方法的全面驗證。

各國藥典對支原體核酸擴增檢測方法（簡(jiǎn)稱(chēng)NAT法）的驗證要求略有出入，但均要求對檢出限、特異性和耐用性進(jìn)行驗證。

在檢測方法上，均建議先做樣本的支原體DNA抽提，再進(jìn)行支原體檢測。

如使用商品化試劑盒，則除了需要試劑盒生產(chǎn)商提供完整的方法學(xué)驗證數據外，還需要使用者驗證試劑盒對其樣本的適用性，以及試劑盒表現出預期的性能（例如檢測限、耐用性、是否存在與細菌的交叉反應）進(jìn)行證明。

德國MB公司提供有10CFU檢測限的支原體高敏標準品，可同時(shí)用于檢測限和耐用性的驗證。