細胞培養中常見(jiàn)的『液體試劑』

細胞的體外培養技術(shù)，是細胞生物學(xué)的一項基本實(shí)驗。了解細胞培養的目的、實(shí)驗材料、實(shí)驗步驟等知識，有利于培養出更健康的細胞，更好地應用于科學(xué)實(shí)驗中。

本期內容，我們來(lái)探討細胞培養過(guò)程中，常見(jiàn)的液體試劑。

培養基是細胞賴(lài)以生存的液體環(huán)境的提供者，人工模擬細胞在體內生長(cháng)的營(yíng)養環(huán)境，為細胞營(yíng)養、促進(jìn)細胞生長(cháng)增殖的物質(zhì)基礎。

基礎培養基是水、無(wú)機鹽、碳水化合物、維生素、氨基酸等成分的混合溶液。一般情況下，會(huì )通過(guò)補加血清或是各類(lèi)不同等成分，配制為適合不同細胞生長(cháng)繁殖的培養基。實(shí)驗中，可以通過(guò)ATCC查詢(xún)所培養的細胞適合什么類(lèi)型的培養基，配制比例是多少。

培養基可以是粉劑或液體，英文均為medium。

培養基有助于保持培養體系中的pH值和滲透壓平衡，是控適宜細胞生長(cháng)的重要且復雜的因素。

對于一些培養難度較大的細胞，選擇一款能夠與細胞“契合"的培養基，有利于維持細胞實(shí)驗結果的穩定。另外，培養基使用的便捷程度，也是不可忽視的一個(gè)方面。

Ausbian干細胞培養基，是在含微量胎牛血清的基礎培養基中，通過(guò)添加一種人永生化干細胞系的條件培養基混合組成，是一款即用型培養基。解凍后即可參與干細胞培養，無(wú)需二次配制，方便快捷且高效。

根據供體動(dòng)物或采血時(shí)間的差異，血清分為許多種類(lèi)。用于動(dòng)物細胞培養的血清主要有牛血清、馬血清、豬血清等。其中，牛血清的使用更為廣泛，胎牛血清憑借其豐富的營(yíng)養，支持多種細胞生長(cháng)繁殖的特性，深受科研人員喜愛(ài)。

合格的胎牛血清，應采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血，內毒素含量也應嚴格控制，過(guò)高的內毒素會(huì )導致細胞提前衰老、凋亡，細胞狀態(tài)變差，相應的實(shí)驗結果也容易產(chǎn)生波動(dòng)。

Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清，采自5-8月齡牛胚胎，澳洲血源，出廠(chǎng)前均經(jīng)過(guò)嚴格質(zhì)控，并附詳細《檢測報告》，內毒素含量≤3EU/ml，盡可能降低內毒素對細胞的影響，為細胞創(chuàng )造一個(gè)健康的生長(cháng)環(huán)境，有利于實(shí)驗的穩定。

在無(wú)菌的理想狀態(tài)下，是沒(méi)有必要添加抗生素的。但由于實(shí)驗環(huán)境在實(shí)際中沒(méi)要辦法做到真正的無(wú)菌，所以很多科研人員會(huì )“習慣性、預防性"地添加抗生素。

但事實(shí)上，抗生素并不是「免死金牌」，真菌、支原體這些污染是它不能夠對抗的，甚至濫用還會(huì )適得其反。

一些文獻中表明：β-內酰胺類(lèi)抗生素及氨基糖甙類(lèi)抗生素，對真核細胞培養有抑制增殖作用，在原代細胞和干細胞等難養細胞上尤其明顯。有研究人員發(fā)現，抗生素（雙抗：青霉素和鏈霉素）的使用影響人體肝細胞中基因表達與基因調控。

雖然抗生素對真核細胞生長(cháng)的影響機制至今尚未明確，但是為了細胞更好的生長(cháng)，實(shí)驗結果更加準確和穩定，在實(shí)驗過(guò)程中盡量不要隨意使用。實(shí)驗室的環(huán)境衛生需要精心維護。

定期清潔、規范操作都是盡量避免實(shí)驗污染的好方法。德國MB公司的支原體污染祛除試劑

細胞培養中，還可能會(huì )用到一些其他液體試劑。

比如用于細胞消化的胰酶，也叫細胞消化液體。常用的胰酶溶液是0.25% 、0.125％的胰蛋白酶與0.02％的二乙胺四乙酸二鈉(EDTA) 調配的溶液。該消化液可以使細胞脫離粘附表面，形成單個(gè)細胞。

酚紅指示劑，一種用于指示pH溶液，中性為紅色，酸性為黃色，堿性為紫色。但并不是所有培養基都要添加酚紅，應根據細胞種類(lèi)、實(shí)驗目的再決定

HEPES，細胞培養中很常見(jiàn)的一種Buffer；谷氨酰胺，可以作為細胞的能量來(lái)源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。但谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應在-20 ℃冰凍保存，添加到液體培養基后，在4℃保存，不要超過(guò)1周。