盤(pán)點(diǎn)核酸法檢測支原體的具體方法

核酸法檢測支原體的有點(diǎn)顯而易見(jiàn)：便捷、高效、準確率高、靈敏度高。核酸法分為普通PCR法和qPCR法。這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，也各有適應場(chǎng)景。

常規法PCR檢測試劑盒——Venor®GeM Classic

該試劑盒可以通過(guò)常規 PCR 對研究和工業(yè)中的細胞培養上清液、培養基和生物制藥中的支原體污染進(jìn)行快速、可靠和省時(shí)的常規監測。

細胞培養物和培養基成分中的支原體（柔膜菌綱：支原體、無(wú)膽原體、螺旋體）物種都是通過(guò)高度保守的 rRNA 操縱子擴增來(lái)特異性檢測的，或者更具體地說(shuō)，通過(guò)擴增支原體基因組中的 16S rRNA 編碼區來(lái)特異性檢測。在265-278 bp處檢測到支原體特異性擴增。通過(guò)使用提供的內擴增對照（在191 bp處檢測到），可以排除由于PCR抑制劑或DNA提取不當引起的假陰性結果。

優(yōu)點(diǎn)：便捷成本低

缺點(diǎn)：無(wú)法定量

qPCR檢測試劑盒——Venor®GeM qEP

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴增反應的實(shí)時(shí)監測，簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、特異性強、時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果，檢測結果可定量，操作簡(jiǎn)便

缺點(diǎn)：

對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。（可用培養法做補充驗證）

不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。

『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹

德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針?lè )z測），依據操作步驟的細微差別， 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

此兩類(lèi)試劑盒較全球其他廠(chǎng)家同類(lèi)產(chǎn)品，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀(guān)察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細胞均為陰性，無(wú)交叉反應）。