核酸法檢測支原體的有點(diǎn)顯而易見(jiàn):便捷、高效、準確率高、靈敏度高。核酸法分為普通PCR法和qPCR法。這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),也各有適應場(chǎng)景。
常規法PCR檢測試劑盒——Venor®GeM Classic
該試劑盒可以通過(guò)常規 PCR 對研究和工業(yè)中的細胞培養上清液、培養基和生物制藥中的支原體污染進(jìn)行快速、可靠和省時(shí)的常規監測。
細胞培養物和培養基成分中的支原體(柔膜菌綱:支原體、無(wú)膽原體、螺旋體)物種都是通過(guò)高度保守的 rRNA 操縱子擴增來(lái)特異性檢測的,或者更具體地說(shuō),通過(guò)擴增支原體基因組中的 16S rRNA 編碼區來(lái)特異性檢測。在265-278 bp處檢測到支原體特異性擴增。通過(guò)使用提供的內擴增對照(在191 bp處檢測到),可以排除由于PCR抑制劑或DNA提取不當引起的假陰性結果。
優(yōu)點(diǎn):便捷成本低
缺點(diǎn):無(wú)法定量
qPCR檢測試劑盒——Venor®GeM qEP
支原體熒光定量PCR法(qPCR):是在常規PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進(jìn)行DNA擴增反應的實(shí)時(shí)監測,簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。
優(yōu)點(diǎn):靈敏度高、特異性強、時(shí)間短,2-3小時(shí)出結果,檢測結果可定量,操作簡(jiǎn)便
缺點(diǎn):
對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會(huì )出現假陽(yáng)性。(可用培養法做補充驗證)
不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導下使用。
『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹
德國MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測試劑盒(均為探針?lè )z測),依據操作步驟的細微差別, 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。
此兩類(lèi)試劑盒較全球其他廠(chǎng)家同類(lèi)產(chǎn)品,具有以下優(yōu)點(diǎn):
①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀(guān)察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無(wú)交叉反應)。