細胞培養中的無(wú)菌技術(shù)
無(wú)菌技術(shù)事細胞培養中,十分重要的一個(gè)環(huán)節。保持實(shí)驗無(wú)菌性、防止污染對于保證細胞狀態(tài)、維持實(shí)驗結果的完整性和穩定性而言,都有著(zhù)重要意義。污染會(huì )嚴重影響實(shí)驗結果,危及整個(gè)實(shí)驗的完整性。
什么是無(wú)菌技術(shù)
細胞實(shí)驗過(guò)程中的污染,來(lái)源廣泛,包括空氣污染物、被污染的介質(zhì)或試劑等。不正確的實(shí)驗操作也會(huì )導致污染。因此,在細胞培養過(guò)程中,每個(gè)實(shí)驗步驟中的“無(wú)菌技術(shù)",就變得很有意義。
無(wú)菌技術(shù)是一套防止微生物(包括細菌、病毒、真菌、支原體等)污染生物樣品或培養物的操作方法。這些技術(shù)一定程度上保證實(shí)驗不受有害微生物的影響,以提高實(shí)驗結果的質(zhì)量。
無(wú)菌技術(shù)有哪些?
1、設備的清潔與滅菌
在開(kāi)始任何細胞培養實(shí)驗之前,必須對所有設備、耗材和試劑進(jìn)行滅菌處理,當然,我們推薦實(shí)驗人員盡量選擇商品化的無(wú)菌試劑。
滅菌方法包括高壓滅菌、過(guò)濾、紫外線(xiàn)照射、乙醇噴灑或擦拭、消毒清潔試劑噴灑或擦拭等。
2、環(huán)境的清潔與滅菌
所有細胞培養工作應在無(wú)菌和清潔的環(huán)境中進(jìn)行。因此要對實(shí)驗環(huán)境進(jìn)行清潔與滅菌。
包括實(shí)驗前對實(shí)驗空間定期清潔,包括桌面、地面、墻面、生物安全柜操作臺等,開(kāi)始實(shí)驗前,還應打開(kāi)生物安全柜中的紫外線(xiàn)燈進(jìn)行照射滅菌。
除了常規的消毒試劑,這里推薦使用德國Minerva Biolabs的Mycoplasma-off支原體祛除噴霧劑,不僅對支原體起作用,還能高效清除并預防細菌、真菌等污染物。
3、正確處理實(shí)驗材料
正確處理實(shí)驗材料,實(shí)驗操作應符合相關(guān)規定、避免交叉污染。包括佩戴適當的個(gè)人防護設備,如手套、口罩;及時(shí)更換移液器一次性器具等操作。
4、實(shí)驗室合理布局
在實(shí)驗過(guò)程中,嚴格遵守實(shí)驗室中物品擺放準則,以培養箱舉例:培養皿擺放密度應合理,宜少不宜多等。
5、定期監測培養物
定期監測培養物,對于及早發(fā)現和解決而言,也是一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。這包括在顯微鏡下檢查培養物狀態(tài)、肉眼觀(guān)察培養基的形態(tài)、顏色等變化等。必要時(shí)可以使用PCR技術(shù)定期測試微生物污染的存在。
德國Minerva Biolabs Venor® Gem Classic支原體檢測試劑盒,用于常規實(shí)驗中支原體的檢測;如果需要進(jìn)行項目申報等流程,需要嚴格的方法學(xué)驗證,可以使用德國Minerva Biolabs Venor® Gem qEP,支原體qPCR檢測試劑盒,通過(guò)《歐洲藥典》和《日本藥典》的方法學(xué)驗證,方便快捷、準確率高。
總結
總之,在細胞培養過(guò)程中保持無(wú)菌條件是保證實(shí)驗結果準確可靠的必要條件。遵循適無(wú)菌技術(shù),定期監測培養,并采取必要的預防措施來(lái)防止污染,可以顯著(zhù)降低細胞培養中生物污染的風(fēng)險。