不同PCR技術(shù)該怎么選？這些關(guān)鍵點(diǎn)要注意！
更新時(shí)間：2023-06-16 | 點(diǎn)擊率：539
聚合酶鏈反應（PCR）是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，廣泛應用于基因分析、疾病診斷和生物學(xué)研究、生物學(xué)檢測等過(guò)程中。
隨著(zhù)科學(xué)的發(fā)展，PCR的變種技術(shù)也不斷涌現。
本文將介紹PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR（qPCR）和數字PCR（dPCR）這三種方法的區別。
普通的PCR是一種在體外擴增特定DNA序列的技術(shù)。它包括三個(gè)步驟：變性、退火和延伸。通過(guò)使用引物、DNA模板和DNA聚合酶，可以在熱循環(huán)過(guò)程中多次復制目標DNA，從而快速擴增特定片段。
qPCR是PCR的實(shí)時(shí)熒光變種。它通過(guò)在PCR過(guò)程中引入熒光探針，實(shí)時(shí)監測擴增反應的進(jìn)程。這種熒光探針與目標DNA序列的特定區域結合，當DNA擴增過(guò)程中的熒光信號增加時(shí)，可以定量測量目標DNA的存在量。
dPCR通過(guò)將PCR反應分割成許多微小反應，使每個(gè)反應中只包含少量的DNA分子。通過(guò)計數陽(yáng)性和陰性反應的數目，可以對目標DNA的存在進(jìn)行定量。dPCR通常使用熒光探針等來(lái)標記反應產(chǎn)物。
基本原理是將稀釋后的核酸溶液，分散至芯片的微反應器或者微滴當中，每個(gè)反應器僅含有微量的核酸模板數。經(jīng)過(guò)PCR擴增之后，有一個(gè)核酸分子的模板的反應器就會(huì )發(fā)出熒光信號，沒(méi)有模板的反應器沒(méi)有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。
檢測方法：PCR和qPCR都是間接檢測方法，依賴(lài)于熒光探針或染料的結合和信號產(chǎn)生。而dPCR是直接計數陽(yáng)性和陰性反應的數目，不需要參考標準曲線(xiàn)或標準樣品。
定量精度：qPCR具有較高的定量精度，可以準確測量目標DNA的存在量。dPCR則具有更高的精確性和靈敏度，可以實(shí)現絕對定量，但對樣本量的需求較高。
靈敏度：dPCR通常比qPCR更敏感，能夠檢測低豐度的目標DNA。
成本和復雜度：PCR和qPCR的成本相對較低，儀器設備和試劑較為普及。而dPCR需要更高的投入成本，并且設備和操作相對復雜。
樣本處理：qPCR通常需要對樣本進(jìn)行前處理，如提取和純化DNA，以獲得較好的擴增效果。而dPCR對樣本的處理要求較低，可以直接使用復雜的樣本。
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