支原體污染
細胞實(shí)驗是生命科學(xué)研究中重要的工具,它們?yōu)榭茖W(xué)家提供了深入了解細胞行為、分子機制以及疾病發(fā)展的機會(huì )。
細胞實(shí)驗的可靠性和可重復性是科學(xué)研究的基石。支原體污染是阻礙實(shí)驗結果準確和可靠的原因之一。支原體是一類(lèi)細小的微生物,它們可以感染人類(lèi)和動(dòng)物細胞,對細胞實(shí)驗的結果產(chǎn)生嚴重影響,引發(fā)了廣泛的關(guān)注。
本期內容,來(lái)講講細胞實(shí)驗中,已報道過(guò)的支原體危害。
影響細胞脂類(lèi)代謝
研究人員以不同濃度的肺炎支原體處理人肺癌上皮細胞,不同時(shí)間后提取胞膜及表面的鞘脂類(lèi),應用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時(shí)間質(zhì)譜一 進(jìn)行分析應用RT-PCR和免疫熒光方法,檢測鞘脂類(lèi)代謝通路中兩個(gè)關(guān)鍵酶的變化。
實(shí)驗結果:
肺炎支原體和細胞大多數鞘脂類(lèi)組成成分相同;感染能影響細胞的鞘脂類(lèi)代謝,包括誘導新種類(lèi)的神經(jīng)酞胺的生成, 升高或降低某些神經(jīng)酞胺的濃度,在一定濃度和時(shí)間點(diǎn)能誘導酸性鞘磷脂酶的聚簇和絲氨酸棕擱酞轉移酶的變化。
對黑色素瘤細胞的影響
在研究早期傳代黑色素瘤細胞系中的干細胞樣特性時(shí),研究人員注意到感染了豬鼻支原體的細胞系的實(shí)驗組的可重復性差。
研究人員用支原體感染其他黑色素瘤細胞系.研究發(fā)現,支原體感染在培養中會(huì )產(chǎn)生多形性效應,從細胞凋亡到增強的致瘤性和侵襲性,并且會(huì )造成相當大的資源浪費和實(shí)驗結果解釋的混亂[2]。
誘導細胞產(chǎn)生炎癥因子
在一項研究中,研究人員利用肺炎支原體感染A549細胞。
研究發(fā)現發(fā)現,肺炎支原體能刺激A549細胞分泌TNF-α, 其產(chǎn)生水平與刺激時(shí)間具有量的正相關(guān)性;肺炎支原體還能刺激A549細胞分泌IL-8, 其產(chǎn)生水平與刺激時(shí)間亦具有量的正相關(guān)性。而被支原體感染的A549細胞分泌TNF-α和IL-8可能與NF-κB的激活有關(guān)。
誘導細胞氧化應激
在這項研究中,研究人員利用多巴胺能神經(jīng)元細胞系(BE-M17),使用單細胞凝膠電泳(彗星試驗),來(lái)評估支原體感染對基因組不穩定性和堿基切除修復(BER)活性的影響。
結果表明,與未感染的細胞相比,支原體感染在沒(méi)有炎癥反應的情況下誘導氧化應激,DNA損傷水平(鏈斷裂/堿不穩定位點(diǎn)(SB/ALS)和氧化嘌呤)顯著(zhù)增加。未感染細胞修復SB/ALS的速度比感染細胞更快。未感染的細胞在24小時(shí)內就能修復氧化嘌呤,而感染的細胞在30小時(shí)后也不能修復。
總之,本研究表明,支原體感染不僅會(huì )誘導氧化應激和DNA損傷,而且還會(huì )降低負責氧化損傷DNA修復的主要途徑,即BER的效率
[1]郁園園. 肺炎支原體感染干擾人肺癌上皮細胞A549的脂類(lèi)代謝[D],2008.
[2]Ji Y, Karbaschi M, Cooke MS. Mycoplasma infection of cultured cells induces oxidative stress and attenuates cellular base excision repair activity. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2019;845:403054. doi:10.1016/j.mrgentox.2019.05.010
[3]肺炎支原體誘導A549細胞分泌腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-8的相關(guān)性[J],2009,30(02):188-190+194.
預防實(shí)驗室中的支原體污染
由于支原體感染細胞,會(huì )帶來(lái)一系列難以預測的生理生化反應,影響實(shí)驗結果,因此,在日常的實(shí)驗中,要注意預防支原體污染的發(fā)生。
除了常規的實(shí)驗室清潔外,建議使用專(zhuān)業(yè)的支原體清除、預防試劑——德國Minerva Biolabs公司的支原體祛除噴霧劑:Mycoplasma-off™,水槽支原體預防試劑:Water Shield™。
Mycoplasma-off™
Mycoplasma-off™特點(diǎn):
(1)快速有效
Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑即用型中含有支原體殺除劑Mynox®,可在幾分鐘內迅速殺除支原體。
(2)廣譜抗菌
不僅能清除并預防支原體,而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。
(3)無(wú)腐蝕性和致癌性
乙醇作為溶劑,無(wú)腐蝕性和致癌性成分。
(4)操作簡(jiǎn)便
即用型消毒液,可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區的清潔干凈。
Mycoplasma-off™使用方法及步驟:
(1)將Mycoplasma-off™均勻噴于待消毒的潔凈臺或實(shí)驗設備和器材的表面。
(2)等待5-10分鐘。
(3)用干燥紙巾將已噴過(guò)Mycoplasma-off™的潔凈臺或實(shí)驗設備和器材的表面搽拭干凈。
(4)將已消毒的潔凈臺通風(fēng)2-3分鐘,或將已消毒的實(shí)驗設備和器材置于通風(fēng)處2-3分鐘。
(5)將剩余的Mycoplasma-off™噴霧劑置于陰涼通風(fēng)處保存。
Water Shield™
細胞培養環(huán)境中,培養箱水槽,水浴鍋經(jīng)常會(huì )有支原體以及各種細菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時(shí),水槽中的水源即會(huì )成為細胞污染的重要來(lái)源。
Water Shield™可持續作用四周,預防水源中的支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。
Water Shield™特點(diǎn):
(1)長(cháng)效。Water Shield™含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò )合劑,不易揮發(fā),可持續作用4周。
(2)安全。不含醛類(lèi)或疊氮化物,對細胞無(wú)毒害。
(3)廣譜。預防支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子污染。
(4)方便。Water Shield™按1:200比例,直接加入水中,使用方便。
(5)不產(chǎn)生水垢。
Water Shield™使用方法及步驟:
(1)Water Shield™和蒸餾水可直接加入培養箱水槽或水浴鍋中。
(2)Water Shield™按1:200比例使用,例如:1000ml蒸餾水+5mlWater Shield™或10L蒸餾水+50mlWater Shield™。
(3)4周左右清洗水槽,換水,重新加入Water Shield™。