有證據了！研究揭示『支原體污染』對細胞實(shí)驗的影響

支原體污染

細胞實(shí)驗是生命科學(xué)研究中重要的工具，它們?yōu)榭茖W(xué)家提供了深入了解細胞行為、分子機制以及疾病發(fā)展的機會(huì )。

細胞實(shí)驗的可靠性和可重復性是科學(xué)研究的基石。支原體污染是阻礙實(shí)驗結果準確和可靠的原因之一。支原體是一類(lèi)細小的微生物，它們可以感染人類(lèi)和動(dòng)物細胞，對細胞實(shí)驗的結果產(chǎn)生嚴重影響，引發(fā)了廣泛的關(guān)注。

本期內容，來(lái)講講細胞實(shí)驗中，已報道過(guò)的支原體危害。

影響細胞脂類(lèi)代謝

研究人員以不同濃度的肺炎支原體處理人肺癌上皮細胞，不同時(shí)間后提取胞膜及表面的鞘脂類(lèi)，應用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時(shí)間質(zhì)譜一 進(jìn)行分析應用RT-PCR和免疫熒光方法，檢測鞘脂類(lèi)代謝通路中兩個(gè)關(guān)鍵酶的變化。

實(shí)驗結果：

肺炎支原體和細胞大多數鞘脂類(lèi)組成成分相同；感染能影響細胞的鞘脂類(lèi)代謝，包括誘導新種類(lèi)的神經(jīng)酞胺的生成， 升高或降低某些神經(jīng)酞胺的濃度，在一定濃度和時(shí)間點(diǎn)能誘導酸性鞘磷脂酶的聚簇和絲氨酸棕擱酞轉移酶的變化。

對黑色素瘤細胞的影響

在研究早期傳代黑色素瘤細胞系中的干細胞樣特性時(shí)，研究人員注意到感染了豬鼻支原體的細胞系的實(shí)驗組的可重復性差。

研究人員用支原體感染其他黑色素瘤細胞系.研究發(fā)現，支原體感染在培養中會(huì )產(chǎn)生多形性效應，從細胞凋亡到增強的致瘤性和侵襲性，并且會(huì )造成相當大的資源浪費和實(shí)驗結果解釋的混亂[2]。

誘導細胞產(chǎn)生炎癥因子

在一項研究中，研究人員利用肺炎支原體感染A549細胞。

研究發(fā)現發(fā)現，肺炎支原體能刺激A549細胞分泌TNF-α, 其產(chǎn)生水平與刺激時(shí)間具有量的正相關(guān)性；肺炎支原體還能刺激A549細胞分泌IL-8, 其產(chǎn)生水平與刺激時(shí)間亦具有量的正相關(guān)性。而被支原體感染的A549細胞分泌TNF-α和IL-8可能與NF-κB的激活有關(guān)。

誘導細胞氧化應激

在這項研究中，研究人員利用多巴胺能神經(jīng)元細胞系(BE-M17)，使用單細胞凝膠電泳(彗星試驗)，來(lái)評估支原體感染對基因組不穩定性和堿基切除修復(BER)活性的影響。

結果表明，與未感染的細胞相比，支原體感染在沒(méi)有炎癥反應的情況下誘導氧化應激，DNA損傷水平(鏈斷裂/堿不穩定位點(diǎn)(SB/ALS)和氧化嘌呤)顯著(zhù)增加。未感染細胞修復SB/ALS的速度比感染細胞更快。未感染的細胞在24小時(shí)內就能修復氧化嘌呤，而感染的細胞在30小時(shí)后也不能修復。

總之，本研究表明，支原體感染不僅會(huì )誘導氧化應激和DNA損傷，而且還會(huì )降低負責氧化損傷DNA修復的主要途徑，即BER的效率

[1]郁園園. 肺炎支原體感染干擾人肺癌上皮細胞A549的脂類(lèi)代謝[D],2008.

[2]Ji Y, Karbaschi M, Cooke MS. Mycoplasma infection of cultured cells induces oxidative stress and attenuates cellular base excision repair activity. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2019;845:403054. doi:10.1016/j.mrgentox.2019.05.010

[3]肺炎支原體誘導A549細胞分泌腫瘤壞死因子-α和白細胞介素-8的相關(guān)性[J],2009,30(02):188-190+194.

預防實(shí)驗室中的支原體污染

由于支原體感染細胞，會(huì )帶來(lái)一系列難以預測的生理生化反應，影響實(shí)驗結果，因此，在日常的實(shí)驗中，要注意預防支原體污染的發(fā)生。

除了常規的實(shí)驗室清潔外，建議使用專(zhuān)業(yè)的支原體清除、預防試劑——德國Minerva Biolabs公司的支原體祛除噴霧劑：Mycoplasma-off™，水槽支原體預防試劑：Water Shield™。 

Mycoplasma-off™

Mycoplasma-off™特點(diǎn)：

（1）快速有效

Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑即用型中含有支原體殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內迅速殺除支原體。   

（2）廣譜抗菌

不僅能清除并預防支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

（3）無(wú)腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無(wú)腐蝕性和致癌性成分。

（4）操作簡(jiǎn)便

即用型消毒液，可以快速簡(jiǎn)單地保持工作區的清潔干凈。

Mycoplasma-off™使用方法及步驟：

（1）將Mycoplasma-off™均勻噴于待消毒的潔凈臺或實(shí)驗設備和器材的表面。

（2）等待5-10分鐘。

（3）用干燥紙巾將已噴過(guò)Mycoplasma-off™的潔凈臺或實(shí)驗設備和器材的表面搽拭干凈。

（4）將已消毒的潔凈臺通風(fēng)2-3分鐘，或將已消毒的實(shí)驗設備和器材置于通風(fēng)處2-3分鐘。

（5）將剩余的Mycoplasma-off™噴霧劑置于陰涼通風(fēng)處保存。

Water Shield™

細胞培養環(huán)境中，培養箱水槽，水浴鍋經(jīng)常會(huì )有支原體以及各種細菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時(shí)，水槽中的水源即會(huì )成為細胞污染的重要來(lái)源。

Water Shield™可持續作用四周，預防水源中的支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。

Water Shield™特點(diǎn)：

（1）長(cháng)效。Water Shield™含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò )合劑，不易揮發(fā)，可持續作用4周。

（2）安全。不含醛類(lèi)或疊氮化物，對細胞無(wú)毒害。

（3）廣譜。預防支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子污染。

（4）方便。Water Shield™按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

（5）不產(chǎn)生水垢。

Water Shield™使用方法及步驟：

（1）Water Shield™和蒸餾水可直接加入培養箱水槽或水浴鍋中。

（2）Water Shield™按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5mlWater Shield™或10L蒸餾水+50mlWater Shield™。

（3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield™。