如何挑選合適的『支原體檢測』試劑盒？

細胞培養過(guò)程中，如果發(fā)生支原體污染，很容易影響細胞的生長(cháng)、代謝和行為，導致實(shí)驗結果出現異常。長(cháng)期存在的支原體污染可能對細胞系的健康產(chǎn)生負面影響，甚至可能改變細胞系的基因表達和生物學(xué)特性。

因此，細胞學(xué)相關(guān)的基礎研究中，需要做好嚴格地衛生清潔工作，預防支原體污染，并使用方便快捷的方法，監測實(shí)驗室及實(shí)驗品中是否存在支原體污染。

如果需要定期檢測細胞實(shí)驗室中的培養物，是否存在支原體污染，推薦使用德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor® Gem Classic支原體常規PCR檢測試劑盒。

通過(guò)擴增16S rRNA編碼區來(lái)特異性檢測支原體，而真核生物和其他細菌DNA(除“檢測特征"部分報道的DNA外)在Venor®GeM Classic檢測中不擴增。

根據支原體種類(lèi)的不同，擴增子的大小在265-278 bp之間。

Venor®GeM Classic常規PCR檢測試劑盒經(jīng)典法特點(diǎn)：

1.內控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

2.高特異性，僅一條陽(yáng)性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀(guān)察。

3.高靈敏度，若PCR反應體系加入10μl樣本，支原體檢測限度為≤5或≤10CFU。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無(wú)膽甾原體和85種支原體，與細胞和真核DNA無(wú)交叉反應。

5.試劑盒中不含Taq酶，可另外購買(mǎi)。推薦使用德國MB公司的Taq酶。

通過(guò)生物技術(shù)生產(chǎn)的藥物、疫苗和其他治療性產(chǎn)品，其制備過(guò)程涉及細胞培養、發(fā)酵和其他復雜的生物學(xué)過(guò)程。如果該過(guò)程存在支原體污染，則可能會(huì )對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生嚴重影響，甚至可能引發(fā)潛在的安全隱患。

各國對于生物醫藥制品的生產(chǎn)過(guò)程中，支原體的檢測有著(zhù)嚴格的要求?！端幍洹分幸幎ā芭囵B法"和“指示細胞法"是傳統方法，如果用核酸法替代傳統方法，需要經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗證。

因此，在選擇臨床項目申報所用的支原體檢測試劑盒時(shí)，需選擇通過(guò)《藥典》方法學(xué)驗證的試劑盒。需要兼顧靈敏度和特異性。

在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴增反應的實(shí)時(shí)監測，簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。

qPCR實(shí)驗優(yōu)點(diǎn)：

①靈敏度高、特異性強。

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結果

③檢測結果可定量

④操作簡(jiǎn)便

綜上，支原體qPCR檢測試劑盒比較合適的選擇。

德國MB支原體qPCR檢測試劑盒：

Venor®Gem qEP

產(chǎn)品特點(diǎn)：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體），根據序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀(guān)察。

③高靈敏度，MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法檢測限可達到≤10CFU/ml。

④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品，便于方法學(xué)驗證。

⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA，便于特異性驗證。

⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品，便于最后定量檢測。

⑦內控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。