提高細胞培養效率的兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)

細胞體外培養技術(shù)的應用，是人類(lèi)開(kāi)啟生命奧秘大門(mén)的鑰匙。該項技術(shù)的發(fā)展，科學(xué)家們能夠脫離供體的情況下，在實(shí)驗室中，研究并分析各種細胞的生命活動(dòng)。高效的細胞培養來(lái)之不易，操作過(guò)程的實(shí)際情況十分復雜，存在諸多可能會(huì )影響培養效率的因素，包括實(shí)驗環(huán)境、實(shí)驗材料的選擇等。

一、實(shí)驗環(huán)境

細胞培養環(huán)境需要嚴格無(wú)菌，甚至是空氣都要使用新風(fēng)系統進(jìn)行過(guò)濾。對于墻壁、地板、桌面、超凈工作臺，更是要定期清潔。德國Minerva Biolabs公司的Mycoplasma-off™ Wipes和Mycoplasma-off™直接用于實(shí)驗環(huán)境、物品、儀器、設備的清潔。該試劑無(wú)需稀釋?zhuān)瑖姙⒒虿潦煤笞匀伙L(fēng)干，即可高效清除環(huán)境中的微生物污染。

細胞培養環(huán)境中，培養箱水槽，水浴鍋經(jīng)常會(huì )有支原體以及各種細菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時(shí)，水槽中的水源即會(huì )成為細胞污染的重要來(lái)源。保持水槽的潔凈，對細胞培養的順利進(jìn)行非常重要。推薦：全球眾多實(shí)驗室日常都在使用德國MB公司生產(chǎn)的Water Shield™支原體污染防護劑（水槽用）。Water Shield™可持續作用四周，使水源避免受到支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。按1:200的比例，加到水浴鍋或培養箱水盤(pán)的無(wú)菌水中即可

二、實(shí)驗材料的選擇

所培養的細胞，來(lái)源應清晰，確保無(wú)污染。對于培養試劑及耗材，也盡可能選擇無(wú)菌的。

細胞離不開(kāi)高品質(zhì)血清。而胎牛血清作為天然的培養基，在培養實(shí)驗中占有重要位置。選擇胎牛血清的重要指標之一，就是考察內毒素的含量。

內毒素在細胞傳代增殖過(guò)程中，會(huì )直接參與細胞凋亡的過(guò)程，一定劑量下，會(huì )給細胞培養帶來(lái)很多問(wèn)題，特別是免疫細胞和干細胞，例如：誘導免疫細胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細胞集落的形成等。因此，血清中內毒素含量越低，對細胞毒性越小，越利于細胞的生長(cháng)和傳代；反之，內毒素含量過(guò)高，會(huì )直接導致細胞狀態(tài)不良，提前老化，甚至死亡。

基于以上研究，用于細胞培養的牛血清，要通過(guò)嚴格的內毒素水平檢測，每一批血清都有完整的檢測報告，通過(guò)內毒素的檢測數值，對血清的品質(zhì)進(jìn)行分級和評估。

目前國際通用的分級方法，均以?xún)榷舅睾康母叩蛠?lái)確定，內毒素含量越低，血清的級別就越高，以胎牛血清為例：

當血清中內毒素含量≤10EU/ml時(shí)，此血清為特級胎牛血清；

當血清中內毒素含量﹥10EU/ml，≤ 25EU/ml時(shí)，此血清為優(yōu)級胎牛血清；

當血清中內毒素含量≥25EU/ml時(shí)，此血清為標準級胎牛血清；

Ausbian®進(jìn)口特級胎牛血清，澳洲血源，均經(jīng)過(guò)嚴格篩選， 目前所有批次內毒素都低于3EU/ml，其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的內毒素血清，更利于細胞的生長(cháng)和傳代。