細胞支原體去除試劑——Mynox使用指南

德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Mynox®是一種支原體去除劑，用于消除細胞、病毒培養物、以及其他生物制劑中的支原體。支原體消除只需6 - 8天(加上4代DNA沖洗)。處理后，Mynox®很容易通過(guò)介質(zhì)更換去除。

Mynox®是一種無(wú)抗生素的生物試劑，可以整合到支原體膜中，損害其完整性。它的活性基于生物物理機制，因此不會(huì )產(chǎn)生耐藥菌株。其結果是滲透性?xún)攘鲗е轮гw膜解體。被清除支原體，細胞可以立即恢復其原有的形態(tài)和正常增殖速度。迄今為止，Mynox®尚未顯示會(huì )導致正常細胞特性的任何變化。

一、貼壁細胞的處理方法

1、制備細胞和『治療液』

在無(wú)菌的6厘米培養皿中加入2.8 ml含5% (v/v) FCS的標準細胞培養基。加入200µl Mynox®(1瓶)。

加入2ml新鮮胰蛋白酶化的10^4 - 10^5個(gè)細胞。

包括細胞在內的處理混合物的總體積為5ml。

2、Mynox®的處理和去除

在正常生長(cháng)條件下，將細胞與『治療液』混合物保持一整個(gè)傳代過(guò)程(約6至8天)。然后除去含有Mynox®的培養基，將細胞在標準培養基中傳代。8天為上限，若細胞未長(cháng)滿(mǎn)皿底，終止處理，丟棄含有Mynox®的培養基，并添加新鮮的標準細胞培養基。

二、懸浮細胞系的處理

1、制備細胞和『治療液』

使用無(wú)菌離心管配制『治療液』。加入1.6 ml 0.125%胰蛋白酶和5 mM EDTA。加入200µl Mynox®(1瓶)。將1.6 ml含有10% (v/v) FCS和10^4 - 10^5細胞的標準細胞培養基，從懸浮細胞培養液中轉移到『治療液』混合物中，進(jìn)行渦旋。包括細胞在內的處理混合物的總體積為3.4 ml。

2、Mynox®的處理和去除

37℃孵育30分鐘。將細胞輕離心(600 × g) 5分鐘，丟棄上清。將細胞重懸于不含Mynox®的標準細胞培養基中，置于培養瓶中。

三、非包膜病毒的處理

冷凍或新鮮等量的細胞和無(wú)細胞碎片的病毒懸浮液可以處理。病毒滴度不影響治療的成功。

1、制備細胞和『治療液』

使用1.5 ml帶安全鎖的無(wú)菌反應管配制消毒液。加入1 ml不含FCS的細胞培養基。加入100µl Mynox®。

將含有8% (v/v) FCS的125µl病毒原液轉移到混合物中。漩渦。包括病毒原液的處理混合物的總體積為1.225 ml。

2、Mynox®的處理和去除

在室溫下將消去液孵育2小時(shí)。將處理混合物在培養基中稀釋1:10，停止反應。

四、包膜病毒的處理

包膜病毒外脂膜的組成與Mynox®的靶標支原體膜相當。這些病毒也容易受到Mynox®滅活的影響，具體取決于所使用的處理時(shí)間和濃度。為了獲得無(wú)支原體的病毒懸浮液，并具有可接受的繼代培養水平，初始病毒滴度應高于10^6 TCID50。

冷凍或新鮮等量的細胞和無(wú)細胞碎片的病毒懸浮液可以處理。

1、制備細胞和『治療液』

使用無(wú)菌15ml螺旋蓋反應管配制消去液。加入4.4 ml不含FCS的細胞培養基。加入100µl Mynox®。將0.5 ml含有8% (v/v) FCS的病毒原液轉入混合物中。漩渦。包括病毒原液的處理混合物的總體積為5ml。

2、處理和Mynox®去除

在室溫下將消去液孵育30分鐘。將處理混合物在培養基中稀釋1:10，停止反應。

五、支原體檢測

經(jīng)Mynox®處理的細胞培養物和病毒庫應在不使用抗支原體抗生素的情況下再培養四代，然后檢測支原體是否存在以驗證培養純度。

對于高靈敏度的支原體污染檢測，我們推薦使用基于pcr的Venor®GeM支原體檢測試劑盒