配制細胞培養基(Cell Culture Medium)時(shí),常使用胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)作為關(guān)鍵成分之一,因為它含有豐富的生長(cháng)因子、蛋白質(zhì)和養分,對細胞的生長(cháng)和繁殖非常有益。以下是配制細胞培養基時(shí)使用胎牛血清的一般步驟:
材料準備:
適當的細胞培養基基礎(例如,DMEM,RPMI-1640,MEM等)。
胎牛血清(FBS)。
雙抗溶液(選加)
步驟:
消毒操作: 在無(wú)菌工作臺下,確保所有用具和試劑都是無(wú)菌的,以防止細胞培養的污染。
血清選擇: 決定所需的FBS濃度。通常,FBS的最終濃度在培養基中約為5%至10%。要注意,不同類(lèi)型的細胞可能需要不同的FBS濃度。一些特殊細胞培養可能需要更低的FBS濃度。
配制培養基: 將血清用三步法解凍,根據您所選擇的基礎培養基的要求,將FBS添加到基礎培養基中。通常,將FBS添加到基礎培養基的體積比例為5%至10%。
添加補充物: 根據您培養的細胞類(lèi)型,可能需要添加額外的補充物,如非必要氨基酸、維生素、雙抗溶液等。確保按照相關(guān)實(shí)驗室方案或文獻中的建議添加這些成分。
混勻: 使輕柔混勻,確保FBS和其他成分均勻分散在培養基中。
保存: 將培養基存儲在4°C的冰箱中,避免陽(yáng)光直射,以延長(cháng)其保存時(shí)間,盡量在1周內用完。
請注意,不同類(lèi)型的細胞可能需要不同的培養基成分和培養條件,因此在開(kāi)始實(shí)驗前,應仔細了解您正在培養的特定細胞類(lèi)型的培養需求,并根據需要進(jìn)行定制化的培養基配制。此外,細胞培養過(guò)程中的無(wú)菌操作非常重要,以防止細胞培養的污染。