CRISPR是一種常用的基因編輯技術(shù),CRISPR/Cas 系統被開(kāi)發(fā)成一種高效的基因編輯工具。在自然界中,CRISPR/Cas系統擁有多種類(lèi)別,其中 CRISPR/Cas9 系統是研究最深入,應用相對成熟的一種類(lèi)別。CRISPR系統在實(shí)驗過(guò)程中,需要對實(shí)驗環(huán)境進(jìn)行核酸污染控制。德國MB公司生產(chǎn)的PCR-Clean,高效清除實(shí)驗環(huán)境或實(shí)驗儀器上的DNA、RNA,和各種核酸酶污染,高效清除核酸相關(guān)污染,為分子實(shí)驗保駕護航。
轉錄終止子,是決定信號RNA聚合酶(RNAPs)在何處停止,并與DNA解離關(guān)鍵點(diǎn)。然而,由于終止是隨機的,可能會(huì )產(chǎn)生兩種不同形式的轉錄本:一種在終止子處終止,另一種繼續讀取。能夠控制這些轉錄本異構體的豐度將為生物工程師提供在轉錄水平上調控多基因構建的機制。
近日,科研人員通過(guò)重新利用終止子作為“轉錄閥",調節RNAP讀取的比例,探索了這一可能性。
相關(guān)研究發(fā)表在《nature communications》上,文章標題為:“Massively parallel characterization of engineered transcript isoforms using direct RNA sequencing"
通過(guò)使用混合DNA組裝,科研人員迭代構建了1780個(gè)T7 RNAP的轉錄閥,并展示了如何使用基于納米孔的直接RNA測序(dRNA-seq)來(lái)在體外同時(shí)以核苷酸分辨率表征整個(gè)閥門(mén)庫,并揭示調控和隔離終止的遺傳設計原則。
最后,科研人員為CRISPR引導RNA的多路調控工程設計了閥門(mén)。這項工作為控制轉錄提供了新的途徑,展示了長(cháng)讀取測序在探索復雜的序列-功能景觀(guān)方面的好處。