隨著(zhù)細胞治療等生物醫藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展,各國法規和相關(guān)機構,也逐步加強了,對生物制品安全性和可靠性的監管。其中支原體檢測,是一個(gè)關(guān)鍵項目。在各國藥典中均指出,可以使用經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗證的核酸法,可替代培養法和指示細胞法,對相關(guān)生物產(chǎn)品進(jìn)行支原體檢測。因此,在進(jìn)行支原體檢測實(shí)驗時(shí),應選擇通過(guò)方法學(xué)驗證的qPCR試劑盒,兼顧靈敏度和特異性,實(shí)現高效且精準的檢測。
如何實(shí)現檢測的高效與精準
生物試劑,尤其是具有活性或功能的試劑,對于產(chǎn)品的劑型、儲存方法、運輸溫度都有比較高的要求。
劑型決定了產(chǎn)品本身是否穩定,而穩定性又進(jìn)一步?jīng)Q定了產(chǎn)品儲存和運輸甚至是使用方法的難易程度。穩定性越好的產(chǎn)品,對于儲存、運輸過(guò)程的溫度要求相對更簡(jiǎn)單,操作難度小,產(chǎn)品則更易保留更大的活性,更容易實(shí)現高效且精準的qPCR檢測結果。
qPCR液體試劑
用于方法驗證的支原體檢測試劑盒以qPCR法為主。目前,市場(chǎng)上大多數支原體檢測類(lèi)的qPCR試劑盒,其試劑多以液體劑型為主。液體液試劑的特點(diǎn)
實(shí)際生產(chǎn)、運輸、使用過(guò)程中,液體試劑很容易發(fā)生失活的情況:
液體活性試劑需要-20℃儲存,在運輸過(guò)程中,為了保持溫度,往往需要干冰運輸,而干冰易揮發(fā),增加了運輸難度。在使用過(guò)程中,也需要先在冰上結凍,再使用,再次增加了反復凍融帶來(lái)的失活風(fēng)險。
qPCR凍干粉試劑
為了克服液體試劑的缺點(diǎn),盡可能保留生物試劑的活性不因溫度的改變而被破壞,德國MB公司的qPCR檢測試劑盒,采用了新型的凍干粉劑型。
凍干粉試劑由于去除水分,可以更好地保持物質(zhì)活性,防止微生物生長(cháng)、減緩氧化反應,相較于液體試劑更不容易失活,更適合長(cháng)期保存、遠距離運輸或高靈敏度的實(shí)驗。
穩定性強:凍干粉試劑在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)冷凍和真空干燥處理,去除了水分,活性物質(zhì)處于“休眠狀態(tài)",進(jìn)而有助于提高試劑的穩定性。避免了液體試劑可能受到環(huán)境濕度、溫度等因素的影響,容易發(fā)生降解,從而影響實(shí)驗結果的缺點(diǎn)。
運輸條件相對簡(jiǎn)單:因此相比于液體試劑,凍干粉試劑更適合長(cháng)期存儲和運輸,對溫度的要求也寬松,4℃(冷鏈溫度:2-8℃)即可,減少了對冷凍設備的依賴(lài),操作運輸簡(jiǎn)便且容錯率高,避免了液體試劑保存過(guò)程中可能引起的失活可能性。
降低污染可能性,適合長(cháng)期儲存和長(cháng)時(shí)間運輸,結果更可靠:由于水分被去除,也減少了其中微生物生長(cháng)繁殖的可能性,降低了試劑被微生物污染的風(fēng)險。因此,與液體試劑相比,凍干粉試劑更適合長(cháng)期保存與運輸,進(jìn)一步提高結果的可靠性。
降低氧化反應:水溶液的存在,容易促使一些氧化反應的發(fā)生,從而導致試劑失活。凍干粉中的低水分含量有助于防止這些氧化反應的發(fā)生,維持試劑的活性。
復溶后即可開(kāi)始實(shí)驗,易于配制:凍干粉試劑的配制相對簡(jiǎn)單,只需加入適量的溶劑即可重新溶解。這不僅減少了操作過(guò)程中的出錯可能性,還降低了試劑的使用成本。相比之下,液體試劑的配制可能需要更多的步驟,而且容易受到人為誤差的影響。此外,凍干粉試劑無(wú)需冷藏,便于儲存和運輸,為實(shí)驗室提供了更靈活的管理選擇。
綜上所述,相較于液體試劑,凍干粉試劑是qPCR實(shí)驗中更好的選擇,尤其是在支原體檢測方法驗證這類(lèi)對于實(shí)驗靈敏度、特異性等方面有高要求的實(shí)驗中。然而,凍干粉試劑的制作,對于工藝的要求更高,需要保證試劑的活性不在制作過(guò)程中造成損失。市面上,德國Minerva Biolabs公司,專(zhuān)注于支原體qPCR凍干粉試劑(Venor Gem qEP)工藝,使用時(shí)復溶即可,盡可能保持試劑的更高活性,為支原體檢測提供更穩定準確的結果,完成高靈敏度、強特異性的方法驗證,遵循歐洲藥典流程要求,已幫助國內外眾多項目通過(guò)方法學(xué)驗證。