悄然的技術(shù)升級——凍干粉讓支原體檢測更穩定、更靈敏

隨著(zhù)細胞治療等生物醫藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，各國法規和相關(guān)機構，也逐步加強了，對生物制品安全性和可靠性的監管。其中支原體檢測，是一個(gè)關(guān)鍵項目。在各國藥典中均指出，可以使用經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗證的核酸法，可替代培養法和指示細胞法，對相關(guān)生物產(chǎn)品進(jìn)行支原體檢測。因此，在進(jìn)行支原體檢測實(shí)驗時(shí)，應選擇通過(guò)方法學(xué)驗證的qPCR試劑盒，兼顧靈敏度和特異性，實(shí)現高效且精準的檢測。

如何實(shí)現檢測的高效與精準

生物試劑，尤其是具有活性或功能的試劑，對于產(chǎn)品的劑型、儲存方法、運輸溫度都有比較高的要求。

劑型決定了產(chǎn)品本身是否穩定，而穩定性又進(jìn)一步?jīng)Q定了產(chǎn)品儲存和運輸甚至是使用方法的難易程度。穩定性越好的產(chǎn)品，對于儲存、運輸過(guò)程的溫度要求相對更簡(jiǎn)單，操作難度小，產(chǎn)品則更易保留更大的活性，更容易實(shí)現高效且精準的qPCR檢測結果。

qPCR液體試劑

用于方法驗證的支原體檢測試劑盒以qPCR法為主。目前，市場(chǎng)上大多數支原體檢測類(lèi)的qPCR試劑盒，其試劑多以液體劑型為主。液體液試劑的特點(diǎn)

實(shí)際生產(chǎn)、運輸、使用過(guò)程中，液體試劑很容易發(fā)生失活的情況：

液體活性試劑需要-20℃儲存，在運輸過(guò)程中，為了保持溫度，往往需要干冰運輸，而干冰易揮發(fā)，增加了運輸難度。在使用過(guò)程中，也需要先在冰上結凍，再使用，再次增加了反復凍融帶來(lái)的失活風(fēng)險。

qPCR凍干粉試劑

為了克服液體試劑的缺點(diǎn)，盡可能保留生物試劑的活性不因溫度的改變而被破壞，德國MB公司的qPCR檢測試劑盒，采用了新型的凍干粉劑型。

凍干粉試劑由于去除水分，可以更好地保持物質(zhì)活性，防止微生物生長(cháng)、減緩氧化反應，相較于液體試劑更不容易失活，更適合長(cháng)期保存、遠距離運輸或高靈敏度的實(shí)驗。

穩定性強：凍干粉試劑在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)冷凍和真空干燥處理，去除了水分，活性物質(zhì)處于“休眠狀態(tài)"，進(jìn)而有助于提高試劑的穩定性。避免了液體試劑可能受到環(huán)境濕度、溫度等因素的影響，容易發(fā)生降解，從而影響實(shí)驗結果的缺點(diǎn)。

運輸條件相對簡(jiǎn)單：因此相比于液體試劑，凍干粉試劑更適合長(cháng)期存儲和運輸，對溫度的要求也寬松，4℃（冷鏈溫度：2-8℃）即可，減少了對冷凍設備的依賴(lài)，操作運輸簡(jiǎn)便且容錯率高，避免了液體試劑保存過(guò)程中可能引起的失活可能性。

降低污染可能性，適合長(cháng)期儲存和長(cháng)時(shí)間運輸，結果更可靠：由于水分被去除，也減少了其中微生物生長(cháng)繁殖的可能性，降低了試劑被微生物污染的風(fēng)險。因此，與液體試劑相比，凍干粉試劑更適合長(cháng)期保存與運輸，進(jìn)一步提高結果的可靠性。

降低氧化反應：水溶液的存在，容易促使一些氧化反應的發(fā)生，從而導致試劑失活。凍干粉中的低水分含量有助于防止這些氧化反應的發(fā)生，維持試劑的活性。

復溶后即可開(kāi)始實(shí)驗，易于配制：凍干粉試劑的配制相對簡(jiǎn)單，只需加入適量的溶劑即可重新溶解。這不僅減少了操作過(guò)程中的出錯可能性，還降低了試劑的使用成本。相比之下，液體試劑的配制可能需要更多的步驟，而且容易受到人為誤差的影響。此外，凍干粉試劑無(wú)需冷藏，便于儲存和運輸，為實(shí)驗室提供了更靈活的管理選擇。

綜上所述，相較于液體試劑，凍干粉試劑是qPCR實(shí)驗中更好的選擇，尤其是在支原體檢測方法驗證這類(lèi)對于實(shí)驗靈敏度、特異性等方面有高要求的實(shí)驗中。然而，凍干粉試劑的制作，對于工藝的要求更高，需要保證試劑的活性不在制作過(guò)程中造成損失。市面上，德國Minerva Biolabs公司，專(zhuān)注于支原體qPCR凍干粉試劑（Venor Gem qEP）工藝，使用時(shí)復溶即可，盡可能保持試劑的更高活性，為支原體檢測提供更穩定準確的結果，完成高靈敏度、強特異性的方法驗證，遵循歐洲藥典流程要求，已幫助國內外眾多項目通過(guò)方法學(xué)驗證。