如何高效清除細胞中的支原體污染？

在細胞培養過(guò)程中，支原體污染是一個(gè)常見(jiàn)且棘手的問(wèn)題。支原體是一種介于細菌和病毒之間的原核生物，形態(tài)多樣，沒(méi)有細胞壁，且能夠直接穿過(guò)常規的除菌濾膜，因此極易造成細胞培養污染。支原體污染不僅會(huì )影響細胞的正常生長(cháng)和代謝，還可能改變細胞的基因表達，干擾實(shí)驗結果，甚至導致實(shí)驗失敗。

一般情況下，細胞感染支原體，我們建議直接丟棄并對環(huán)境進(jìn)行消毒處理，但總有一些特殊情況，導致我們不能丟棄辛苦培養的細胞，這時(shí)就可以派細胞用支原體祛除試劑上場(chǎng)了。

1、對于已發(fā)生支原體污染的細胞，不愿隨意丟棄，希望繼續培養時(shí)，可選擇Zell Shield®細胞支原體祛除試劑（貨號：13-0050/13-0150）。

如已轉染或大量擴增的細胞等情況，需要對已被支原體污染的細胞進(jìn)行拯救。使用含有復合抗生素成分的Zell Shield®細胞支原體祛除試劑，可以抑制支原體蛋白和DNA合成，同時(shí)對細菌和真菌也有抑制作用。

先使用廠(chǎng)家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞，再使用加了Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的培養基養細胞，按照使用說(shuō)明進(jìn)行操作，使用Zell Shield®細胞支原體祛除試劑培養4代后，細胞中的支原體即可祛除。

懸浮沖洗法及試劑使用方法：

（1）消化細胞：將培養瓶或培養皿中的細胞消化下來(lái)。

（2）離心：將消化好的細胞寄培養液轉移至離心管中，進(jìn)行常規離心。

（3）清洗細胞：棄上清后，用無(wú)菌PBS輕柔吹打清洗細胞。

（4）重復清洗：將PBS和細胞的混合物進(jìn)行低速離心，棄上清并重復清洗3次.

（5）重新培養：最后一次清洗結束后，棄掉PBS上清液，加入含有Zell Shield®細胞支原體祛除試劑的新鮮培養基進(jìn)行培養，4代后，細胞中的支原體即可祛除。

2、對于無(wú)法長(cháng)期培養的珍貴樣本或病毒收獲液，則可以使用德國MB公司的Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑（貨號: 10-0200/ 10-0500/ 10-1000）。

該試劑含有「治療液」和「鞏固防護液」?！钢委熞骸箒?lái)自枯草桿菌提取物，可特異性地與支原體膜結合，改變支原體膜通透性，從而使支原體在2-3小時(shí)內破潰死亡；「鞏固防護液」加入培養基，后續培養一個(gè)月，細胞將會(huì )清除支原體的污染，確切有效。

使用方法：

（1）細胞重新傳代時(shí)，用含Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑、5%FBS的的培養基替換原有培養基，對細胞進(jìn)行培養。

（2）孵育培養2-3小時(shí)。

（3）對細胞進(jìn)行換液。

（4）用不含Mynox®的正常培養基（原始培養條件）對細胞進(jìn)行培養，傳代3-4次。

（5）可對細胞進(jìn)行支原體檢測，觀(guān)察細胞狀態(tài)。

3、對于可以培養超過(guò)一個(gè)月的珍貴細胞株，如果需要對其進(jìn)行祛除支原體的處理，可以使用德國MB公司的Mynox® Gold珍貴細胞株支原體清除試劑（貨號：10-0201/ 10-0501/ 10-1001）。

該試劑分為直接殺除+鞏固防護兩步處理，祛除支原體的同時(shí)，可進(jìn)一步在后續培養中鞏固清除效果，防止支原體“卷土重來(lái)"。

使用方法：

（1）治療液與含5%FBS的培養及混合

（2）將混合后的治療液添加至培養皿中

（3）將接種細胞

（4）培養細胞至80%-90%匯合后，進(jìn)行傳代

（5）傳代的同時(shí)加入鞏固液

重復（4）（5）兩次

（6）在無(wú)Mynox® Gold的情況下傳代

（7）用Venor® Gem支原體檢測試劑盒檢測