雙重PDGFRα/β阻斷間質(zhì)重編程，Zell Shield助力細胞培養

過(guò)量的間質(zhì)和癌癥相關(guān)成纖維細胞(CAF)促進(jìn)癌癥進(jìn)展并促進(jìn)免疫逃避。對基質(zhì)操縱免疫微環(huán)境的機制的深入了解有助于改善癌癥的治療。

發(fā)表在《Cancer Research》上，標題為“Stromal Reprogramming through Dual PDGFRα/β Blockade Boosts the Efficacy of Anti-PD-1 Immunotherapy in Fibrotic Tumors"的研究，闡明基質(zhì)重編程和改進(jìn)癌癥免疫治療的潛在途徑。血小板衍生生長(cháng)因子C (PDGFC)和D的表達與胃癌患者的不良預后顯著(zhù)相關(guān)，PDGF受體β (PDGFRβ)在彌漫性胃癌間質(zhì)中主要表達。經(jīng)PDGFs刺激的CAFs顯示CXCL1、CXCL3、CXCL5和CXCL8的表達顯著(zhù)增加，這些細胞參與多形核髓源性抑制細胞(PMN-MDSC)的募集。纖維化胃癌異種移植腫瘤表現為PMN-MDSC積累增加，淋巴細胞浸潤減少，抗pd -1耐藥。單細胞RNA測序和空間轉錄組學(xué)顯示PDGFRα/β阻斷通過(guò)基質(zhì)修飾逆轉免疫抑制微環(huán)境。最后，PDGFRα/β阻斷聯(lián)合抗pd -1治療可協(xié)同抑制纖維化腫瘤的生長(cháng)。這些發(fā)現強調了間質(zhì)重編程對免疫再激活的影響，以及纖維化癌患者聯(lián)合免疫治療的潛力。

為了建立連續移植小鼠模型，科研人員將GAN-KP細胞皮下植入小鼠側腹。腫瘤細胞接種3周后處死小鼠。將含有各種非癌成分(如成纖維細胞)的腫瘤塊在1x TDR (BD Biosciences)中切碎并解離，在37°C下連續旋轉30分鐘。將樣品懸浮于含有2% FBS和2 mmol/L EDTA的PBS緩沖液中，將細胞懸浮液應用于70 μm濾網(wǎng)。每個(gè)樣品中含有的紅細胞通過(guò)加入1ml VersaLyse (Beckman Coulter)溶解10分鐘，然后在緩沖液中冷卻。將微球鍍在膠原包被培養皿(IWAKI)上，用含有10% FBS和Zell Shield (Minerva Biolabs)的RPMI1640培養。細胞培養1周后皮下植入小鼠側腹。腫瘤細胞接種3周后處死小鼠。該過(guò)程作為連續移植方法重復進(jìn)行。

Zell Shield可以預防細胞實(shí)驗室的細胞支原體污染，方便高效。