hiPSC向心肌細胞分化過(guò)程中lncRNA的變化，支原體檢測試劑盒助力科研

長(cháng)鏈非編碼RNA (Long non-coding rna, lncRNAs)是數量最多、種類(lèi)很多的一類(lèi)非編碼RNA。它們定位于細胞核、細胞質(zhì)或兩個(gè)區室，并通過(guò)多種機制在多個(gè)水平上調控基因表達。LncRNAs往往比蛋白質(zhì)編碼基因進(jìn)化得更快，并且具有更高的組織和發(fā)育階段特異性表達。lncRNA最初被認為是錯誤轉錄的副產(chǎn)物，沒(méi)有生物學(xué)功能，現在被認為參與了許多生物學(xué)過(guò)程，如免疫反應、細胞凋亡、多能性、重編程和分化。在這項研究中，我們重點(diǎn)研究了心臟制動(dòng)lncRNA 1 (HBL1)，這是一種近期報道的調節多能干細胞向心肌細胞分化過(guò)程的lncRNA。

近日，發(fā)表在《Scientifc Reports》上，標題為：“Dynamic changes in LINC00458/HBL1 lncRNA

expression during hiPSC diferentiation to cardiomyocytes"的文章中，科研人員使用RT-qPCR和高分辨率RNA FISH來(lái)監測分化過(guò)程中HBL1的表達和定位。研究結果表明，HBL1表達在中胚層和心臟中胚層階段顯著(zhù)增加，在預期的分化細胞減少之前。在細胞核和細胞質(zhì)中分別檢測到RNA的離散灶。在后一個(gè)隔間中，我們觀(guān)察到HBL1與Y-box結合蛋白1 (YB-1)共定位，這可能是RNA和蛋白質(zhì)相互作用的結果，因為在RNP-IP實(shí)驗中發(fā)現兩者共免疫沉淀。最后，我們提供的證據表明，HBL1最初被報道為一個(gè)獨立的lncRNA基因，是LINC00458(也稱(chēng)為lncRNA-ES3或ES3)基因的一部分，形成一些LINC00458剪接異構體的最后外顯子。

其中，科研人員將買(mǎi)來(lái)的內皮祖細胞(來(lái)源于外周血)建立的人iPSC細胞系，于Essential 8™Flex培養基中，用重組人玻璃體連接蛋白(rhVTN-N)上進(jìn)行培養。流式細胞術(shù)檢測細胞中Oct3/4和Sox2的表達，用德國MB公司生產(chǎn)的Venor GeM qEP試劑盒檢測支原體的表達，檢測細胞的多能性水平。根據Ref.13發(fā)表的方案將hipsc分化為心肌細胞。簡(jiǎn)單地說(shuō)，用3 μM CHIR99021在CDM3培養基中(RPMI 1640中添加500 μg/mL重組人白蛋白和213 μg/mL l -抗壞血酸2-磷酸)處理90%融合度的hiPSCs 48 h。在CDM3培養基中處理24 h后，用4 μM IWR-1在CDM3培養基中處理48 h。細胞在CDM3培養基中培養48 h后，在添加B-27的RPMI培養基中培養。此外，在相同的條件下，從外周血單核細胞(PBMCs)重編程的另一種hiPSC系被培養和分化。